[發明專利]一種納豆芽孢桿菌及在納豆發酵產納豆激酶中的應用

在審

• 申請號: 202111363733.8
• 申請日: 2021-11-17
• 公開（公告）號: CN113881608A
• 公開（公告）日: 2022-01-04
• 發明（設計）人: 閆繼彪;鄧承遠;李磊;李翠平;任冬艷
• 申請（專利權）人: 內蒙古普澤生物制品有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/56;C12R1/07
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

1.一種納豆芽孢桿菌，其特征在于，所述納豆芽孢桿菌為納豆芽孢桿菌(Bacillusnatlo)PZBn03，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNo.21541，保藏時間為2020年12月23日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，分類命名為納豆芽孢桿菌Bacillus natto。

2.權利要求1所述的納豆芽孢桿菌在納豆發酵產納豆激酶中的應用。

3.一種具有溶栓效果的高活性納豆激酶的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：

1)以納豆芽孢桿菌PZBn03對大豆進行發酵，待大豆成拉絲狀，以清水：大豆比例為3:1的質量比進行清洗，少量多次，收集清洗液；

2)向清洗液中加入清洗液重量10％的麥芽糊精，攪拌至麥芽糊精溶解，凍干，得納豆激酶。

4.根據權利要求3所述的一種具有溶栓效果的高活性納豆激酶的制備方法，其特征在于，步驟1)中，以納豆芽孢桿菌PZBn03對大豆進行發酵的過程為：

11)對納豆芽孢桿菌PZBn03進行活化、擴培、離心，收集菌泥，再加入保護劑，115℃，20min滅菌，凍干，得納豆芽孢桿菌PZBn03菌粉；其中，凍干條件為：壓強0.065MPa，溫度-54℃，時間6h；

12)將大豆進行蒸煮，水沸騰30min后，分離大豆和豆汁，對大豆繼續進行蒸煮，蒸煮好備用，豆汁晾涼備用；

13)稱取1g納豆芽孢桿菌PZBn03菌粉活化于晾涼后的50ml豆汁中，需氧培養，37℃，24h，然后將活化好的納豆芽孢桿菌PZBn03接種于自制的豆汁中進行擴培，需氧培養，37℃，24h，得納豆芽孢桿菌PZBn03菌液；

14)將納豆芽孢桿菌PZBn03菌液倒在蒸煮好的大豆表面，覆膜，發酵。

5.根據權利要求4所述的一種具有溶栓效果的高活性納豆激酶的制備方法，其特征在于，步驟11)中，所述活化、擴培為：取原始納豆芽孢桿菌PZBn03接種于MRS液體培養基中培養，需氧培養，37℃，24h，然后用接種針蘸取菌液劃線于MRS固體培養基中培養，需氧培養，37℃，24h，再挑單菌落接種于MRS液體培養基中培養，需氧培養，37℃，24h，最后，吸取菌液擴培到MRS液體培養基中培養，需氧培養，37℃，24h。

6.根據權利要求5所述的一種具有溶栓效果的高活性納豆激酶的制備方法，其特征在于，步驟11)中，所述保護劑包括：脫脂奶粉溶液45ml、乳糖溶液10ml、抗壞血酸溶液10ml、味精溶液10ml；且各溶液的溶質分別為9g、乳糖7.2g、9g、9g。

7.根據權利要求6所述的一種具有溶栓效果的高活性納豆激酶的制備方法，其特征在于，步驟13)中，納豆芽孢桿菌PZBn03的接種量為大豆質量的4％。

8.根據權利要求7所述的一種具有溶栓效果的高活性納豆激酶的制備方法，其特征在于，步驟14)中，覆膜后，需在膜上開設小孔，再進行發酵。