[發明專利]一種脫細胞真皮基質微粒的制備方法在審
| 申請號： | 202111363652.8 | 申請日： | 2021-11-17 |
| 公開（公告）號： | CN114146224A | 公開（公告）日： | 2022-03-08 |
| 發明（設計）人： | 楊屈楊;朱寧文 | 申請（專利權）人： | 英中再生醫學（山東）有限公司 |
| 主分類號： | A61L27/36 | 分類號： | A61L27/36;A61L27/50 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 273200 山東省濟寧市泗水縣經濟開*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 真皮 基質 微粒 制備 方法 | ||
1.一種脫細胞真皮基質微粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)去表皮：將豬皮經消毒、清洗后，使用氯化鈉溶液除去表皮；
(2)去除真皮中細胞成分：去表皮后成分依次經氫氧化鈉溶液浸泡、SDS溶液浸泡、胰蛋白酶-EDTA溶液浸泡、清洗后，得到脫細胞真皮基質；
(3)制備脫細胞真皮基質微粒：將所述脫細胞真皮基質依次經打漿、均質、過篩后得到脫細胞真皮基質微粒。
2.如權利要求1所述的一種脫細胞真皮基質微粒的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述消毒、清洗為用質量濃度0.1％的新潔爾滅溶液浸泡30～60min，之后用PBS溶液清洗1～2遍。
3.如權利要求1所述的一種脫細胞真皮基質微粒的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述使用氯化鈉溶液除去表皮的具體操作為：使用質量濃度為1～3％的氯化鈉溶液25～37℃浸泡48～72h，期間進行攪拌，攪拌速度為300～500rpm；之后使用ddH2O清洗2～3遍。
4.如權利要求1所述的一種脫細胞真皮基質微粒的制備方法，其特種在于，步驟(2)中所述氫氧化鈉溶液浸泡為：使用質量濃度為0.5～1.0％的氫氧化鈉溶液25～37℃浸泡12～24h，期間進行攪拌，攪拌速度為300～500rpm。
5.如權利要求1所述的一種脫細胞真皮基質微粒的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述SDS溶液浸泡為：使用質量濃度為0.25～0.5％的SDS溶液25～37℃浸泡40～48h，期間進行攪拌，攪拌速度為300～500rpm。
6.如權利要求1所述的一種脫細胞真皮基質微粒的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述胰蛋白酶-EDTA溶液浸泡為：使用胰蛋白酶-EDTA溶液在37℃下浸泡12～24h，期間進行攪拌，攪拌速度為300～500rpm。
7.如權利要求1所述的一種脫細胞真皮基質微粒的制備方法，其特征在于，所述步驟(3)的具體操作為：
(31)25～37℃均質研磨20～30min,研磨條件為：利用IKA研磨機間斷性研磨，最大轉速為28000rpm；
(32)使用液氮冷凍10min，機械碾碎后放入IKA研磨機間斷性均質，時間10min，最大轉速為28000rpm，并在均質過程中加入1～2次液氮；
(33)根據分樣篩的孔徑獲得400μm以下大小的脫細胞真皮基質微粒。
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