[發明專利]一種Oligo-dT親和層析填料

在審

• 申請號: 202111362343.9
• 申請日: 2021-11-17
• 公開（公告）號: CN114054006A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 劉勁松;戚紫燕;王捷;劉剛;金百勝;林生躍;趙光耀;江必旺
• 申請（專利權）人: 蘇州納微科技股份有限公司;常熟納微生物科技有限公司
• 主分類號: B01J20/286
• 分類號: B01J20/286;B01J20/30
• 代理公司: 蘇州華博知識產權代理有限公司 32232
• 代理人: 何蔚

本發明提供了一種Oligo?dT親和層析填料，以表面親水的、具有多羥基親水官能團的聚合物微球為基球，通過聚合物微球表面的羥基將dT核苷酸單體鍵合生成oligo?dT配基到聚合物表面而制得。本發明相比常規Oligo?dT親和填料具有更高的mRNA載量以及更高的mRNA回收率，還具有比常規oligo?dT親和填料更好的耐堿性。本發明制備方法簡單，不需要現有技術中oligo?dT親和填料生產所需要的oligo?dT配基合成與純化，可以大大降低親和填料的生產成本，從而降低mRNA的生產純化成本。

技術領域

本發明涉及純化技術領域，特別是涉及一種Oligo-dT親和層析填料。

背景技術

Oligo-dT親和層析廣泛用于將mRNA體外轉錄(IVT)制造工藝中的純化，這種親和層析方法可以有效地將mRNA與轉錄反應過程的其它成分(如酶和質粒DNA等等)分離。現有技術(Prior arts)生產的oligo-dT親和層析填料一般都是通過鍵合Oligo-dT配基到層析填料表面而成，Olig-dT配基一般是通過多步驟的固相合成方法制備而成。這種固相合成的方法需要用到昂貴的固相合成基球及固相合成linker，Oligo-dT配基合成后從固相載體上脫離下來后進行功能化修飾，以及繁雜的色譜純化分離工藝，因此，oligo-dT的價格非常昂貴，以至于Oligo-dT親和填料的生產成本都非常高，嚴重阻礙這種親和填料在大規模mRNA生產純化工藝中的應用。另外，現有技術生產的Oligo-dT親和填料所用的配基鍵合化學聯結往往在強堿下不太穩定，以至于親和填料在再生regeneration和CIP過程(親和填料的CIP條件一般都是0.1-0.5M NaOH)中容易發生配基脫落，嚴重影響填料的壽命。

發明內容

本發明的目的在于提供一種新型Oligo-dT親和層析填料，不僅具有很好的mRNA結合能力，具有更高的mRNA載量以及更高的mRNA回收率，并且具有更好的耐堿性。

為達到上述目的，本發明的技術方案如下：一種Oligo-dT親和層析填料，以表面具有多羥基親水官能團的聚合物微球為基球，通過聚合物微球表面的羥基將嘧啶(dT)核苷酸單體鍵合生成oligo-dT配基到聚合物表面而制得。

優選的，所述作為基球的聚合物微球為PS-DVB、聚甲基丙烯酸酯、聚酰胺、聚醚類、交聯纖維素類高分子樹脂。

優選的，所述聚合物微球表面的多羥基親水官能團可以是在聚合物微球制備時引入，也可以是通過表面化學修飾或者表面親水包覆而得到。

優選的，所述聚合物微球的交聯度大于20％。

優選的，所述聚合物微球的交聯度在45％～65％之間。

優選的，所述聚合物微球是大孔徑聚合物微球，孔徑大于

優選的，所述聚合物微球的孔徑大于

優選的，所述聚合物微球通過表面的羥基直接與dT單體鍵合，通過固相合成的方法在聚合物微球表面生成oligo-dT配基，并循環鍵合至少一次以成長出oligo-dT鏈。

優選的，所述聚合物微球表面的dT核苷酸單體鍵合循環次數不少于10次。

優選的，聚合物微球表面的dT核苷酸單體鍵合循環次數不少于15次。

優選的，聚合物微球表面的dT核苷酸單體鍵合循環次數是15-30次，即鍵合15-30個核苷酸單位(dT15-dT30)。

優選的，所述dT核甘酸單體可以是5‘-位保護的磷酸二酯(phosphodiester)結構,也可以是5‘-位保護的亞磷酰胺(phosphoramidite)結構。

其中，如果dT核甘酸單體是磷酸二酯類型，每個單體鍵合固相合成循環有鍵合和5’-位脫保護兩個步驟；如果dT核苷酸單體是亞磷酰胺類型，則每個單體鍵合循環包括鍵合、氧化、5’-位脫保護三個步驟。