[發(fā)明專利]一種體外分析檢測用細胞保存液及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111360381.0 | 申請日： | 2021-11-17 |
| 公開（公告）號： | CN113966737B | 公開（公告）日： | 2022-10-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鞏贊華;鞏贊博;鞏贊斌 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳市華晨陽科技有限公司 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京維正專利代理有限公司 11508 | 代理人： | 陳方;梁宇珊 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市寶安區(qū)新橋*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 體外 分析 檢測 細胞 保存 及其 制備 方法 | ||
本申請涉及生物保存液技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種體外分析檢測用細胞保存液及其制備方法。所述細胞保存液包括如下濃度范圍的組分：細胞固定劑60?75v/v%、滲透壓調(diào)節(jié)劑0.6?0.9g/100mL、抗凝劑0.2?0.5g/100mL、殼聚糖季銨鹽0.3?0.6g/100mL、海藻糖0.05?0.2g/100mL；溶劑為超純水，pH為7.0?7.6。其將少量的海藻糖與殼聚糖季銨鹽合用，可有效增強保護作用，有效減少細胞發(fā)生自溶腐敗，提高細胞保存的完整性。該細胞保存液在制備時，使用超純水先將細胞固化劑以外的組分溶解，能有效提高組分的溶解效果，獲得均一穩(wěn)定的細胞保存液，便于細胞保存液的批量生產(chǎn)。
技術(shù)領(lǐng)域
本申請涉及生物保存液技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種體外分析檢測用細胞保存液及其制備方法。
背景技術(shù)
對于如口腔、鼻咽、肛門等非血液途徑獲取的細胞，如何維持細胞活性是一項極大的挑戰(zhàn)，在短時間內(nèi)保存細胞并在臨床上應用時，往往使用生理鹽水來維持細胞活性，然而細胞在生理鹽水中活性降低的速度較快，10小時之內(nèi)細胞的活性喪失率可達30%甚至更高，然而許多對細胞的觀察測試從取樣到應用可能需要超過10小時、24小時，甚至多達數(shù)天，生理鹽水無法滿足需求。
為了解決這一問題，各類細胞保存液應運而生。細胞保存液是一種能夠幫助細胞保持原有形態(tài)、結(jié)構(gòu)的一種化學藥品，其功能是減小細胞死亡后的變化，阻止其自溶腐敗，盡量保持生長狀態(tài)結(jié)構(gòu)，同時使細胞中的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持其生前的形態(tài)。
目前市場上有許多不同種類的細胞保存液，不同的廠商擁有自己的保存液配方。然而，市面上的細胞保存液在保存細胞過程中，細胞仍會發(fā)生一定的自溶腐敗，使得細胞保存的完整性較差。
發(fā)明內(nèi)容
為了減少細胞在保存過程中發(fā)生自溶腐敗，本申請?zhí)峁┮环N體外分析檢測用細胞保存液及其制備方法。
第一方面，本申請?zhí)峁┮环N體外分析檢測用細胞保存液，采用如下的技術(shù)方案：
一種體外分析檢測用細胞保存液，包括如下濃度范圍的組分：細胞固定劑60-75v/v%、滲透壓調(diào)節(jié)劑0.6-0.9g/100mL、抗凝劑0.2-0.5g/100mL、殼聚糖季銨鹽0.3-0.6g/100mL、海藻糖0.05-0.2g/100mL；溶劑為超純水，pH為7.0-7.6。
通過采用上述技術(shù)方案，本申請中細胞固定劑能固定細胞、病毒等結(jié)構(gòu)，保存細胞、病毒等結(jié)構(gòu)的形態(tài)并避免細胞內(nèi)蛋白酶的裂解作用及核酸消化酶對核酸的消化作用，保存蛋白及核酸完整性以便后續(xù)分析；滲透壓調(diào)節(jié)劑可用于調(diào)節(jié)細胞保存液的滲透壓，能最大限度地保持細胞的形態(tài)完整，使之充分懸浮劑分散；抗凝劑用于螯合溶液中引入的重金屬離子，防止細胞凝聚；殼聚糖季銨鹽能固定細胞，具有良好的抗菌性；海藻糖是一種非還原性雙糖，具有非常穩(wěn)定的理化作用，對細胞無任何毒副作用，能夠有效穩(wěn)定細胞膜和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。
其中，本申請將少量的海藻糖與殼聚糖季銨鹽合用，可有效增強保護作用，即便不額外添加防腐劑、滅菌劑等助劑，亦具有良好的殺菌效果，能快速滅活病毒或其他病原體以阻止其影響細胞活性；此外因海藻糖能在高滲透壓等惡劣環(huán)境下在細胞表面形成獨特的保護膜，有效保護細胞結(jié)構(gòu)不被破壞，進而能有效減少細胞發(fā)生自溶腐敗，有助于提高細胞保存的完整性。
優(yōu)選的，所述殼聚糖季銨鹽與所述海藻糖的重量濃度比為3:1。
通過采用上述技術(shù)方案，當殼聚糖季銨鹽與海藻糖的重量濃度比為3:1時，其配制的細胞保存液對細胞的保存效果明顯優(yōu)于其他配比，因此將其作為進一步優(yōu)選。
優(yōu)選的，所述細胞固定劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇中的一種或多種的混合物。
優(yōu)選的，所述細胞固定劑為乙醇。
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