[發(fā)明專利]用于檢測食道癌的組合物及其用途

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• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN114032307A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設計）人: 馬竣;韓曉亮;王建銘
• 申請（專利權）人: 博爾誠（北京）科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;G01N33/574;C12N15/11
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 閆桑田;劉磊

1.一種用于體外檢測食管癌的組合物，所述組合物包括：

用于檢測目標基因靶序列甲基化狀態(tài)的核酸，以及

用于檢測目標蛋白濃度的抗體，

其中，所述目標基因為MT1A基因和EPO基因中的一種或兩種，

所述目標蛋白為γ突觸核蛋白(SNCG)。

2.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述MT1A基因的靶序列如SEQ ID NO:1所示。

3.根據權利要求1所述的組合物，其中，所述EPO基因的靶序列如SEQ ID NO:3所示。

4.根據權利要求1～3中任一項所述的組合物，其中，所述用于檢測目標基因靶序列甲基化狀態(tài)的核酸包括：

所述目標基因靶序列中至少9個核苷酸的片段，

所述片段包含至少一個CpG二核苷酸序列。

5.根據權利要求1～4中任一項所述的組合物，其中，所述用于檢測目標基因靶序列甲基化狀態(tài)的核酸包括：

在中等嚴緊或嚴緊條件下雜交于所述目標基因靶序列中至少15個核苷酸的片段，

所述片段包含至少一個CpG二核苷酸序列。

6.根據權利要求1～5中任一項所述的組合物，其還包括：

將目標基因靶序列的5位未甲基化胞嘧啶堿基轉化為尿嘧啶的試劑。

7.根據權利要求1～6中任一項所述的組合物，其中，所述用于檢測目標基因甲基化狀態(tài)的核酸還包括：

優(yōu)先與處于非甲基化狀態(tài)的靶序列結合的阻斷劑。

8.根據權利要求7所述的組合物，其中，

所述至少9個核苷酸的片段，其為SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6的序列，或者其為SEQ IDNO:9和SEQ ID NO:10的序列，

所述至少15個核苷酸的片段，其為SEQ ID NO:7的序列或SEQ ID NO:11的序列，

阻斷劑，其為SEQ ID NO:8的序列或SEQ ID NO:12的序列。

9.根據權利要求1～8中任一項所述的組合物，所述組合物還包括：

用于檢測目標蛋白濃度的試劑，所述試劑為酶聯(lián)免疫吸附測定試劑，例如，所述試劑包括用于檢測目標蛋白濃度的抗體包被的反應板，SNCG蛋白酶結合物，底物液，洗液和終止液。

10.根據權利要求1～9中任一項所述的組合物在用于制備用于體外檢測食管癌的試劑盒中的用途。

11.根據權利要求10所述的用途，其中，所述用于體外檢測食管癌的試劑盒通過包括如下步驟的方法來檢測食管癌：

提取受試者的生物樣品，

提取生物樣品中的包括目標基因靶序列或其片段的DNA樣品；

確定所述目標基因靶序列的甲基化狀態(tài)；

確定生物樣品中所述目標蛋白濃度；以及

通過所述目標基因靶序列甲基化狀態(tài)和目標蛋白濃度的檢測結果聯(lián)合判斷受試者是否患有食管癌，從而實現對食管癌的體外檢測。

12.根據權利要求10所述的用途，其中，所述方法包括如下步驟：

抽取受試者的外周血；

從外周血樣本中分離出血漿或血清；

從血漿或血清中提取游離DNA；

使用試劑處理提取的游離DNA，使5位未甲基化的胞嘧啶堿基轉化為尿嘧啶或其它堿基；

將試劑處理過的DNA樣品與DNA聚合酶和目標基因靶序列的引物接觸，并在優(yōu)先與處于非甲基化狀態(tài)的靶序列結合的阻斷劑的存在下進行DNA聚合反應；

用探針檢測擴增產物；

基于所述擴增產物是否存在，確定所述目標基因靶序列的至少一個CpG二核苷酸的甲基化狀態(tài)；

使用SNCG抗體，通過免疫反應，確定血漿或血清中SNCG蛋白的濃度。

13.根據權利要求12所述的用途，其中，所述試劑為亞硫酸氫鹽試劑。