[發明專利]改變CART細胞中的基因表達及其用途

在審

• 申請號: 202111354276.6
• 申請日: 2015-10-15
• 公開（公告）號: CN114836385A
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 趙陽兵;J·任;X·劉;C·H·瓊
• 申請（專利權）人: 賓夕法尼亞大學董事會
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;C12N15/113;A61K35/26;A61K39/00;A61P35/00;A61P37/06
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 顏芳

1.修飾的T細胞，其包括：

能夠下調內源基因的基因表達的核酸，所述內源基因選自TCRα鏈、TCRβ鏈、β-2微球蛋白、HLA分子、CTLA-4、PD1和FAS；和

編碼嵌合抗原受體(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受體(CAR)包括抗原結合結構域、跨膜結構域和共刺激分子的胞內結構域。

2.權利要求1所述的修飾的T細胞，其中能夠下調基因表達的所述核酸選自反義RNA、antigomer RNA、siRNA、shRNA和CRISPR系統。

3.權利要求2所述的修飾的T細胞，其中所述CRISPR系統包括pAd5/F35-CRISPR載體。

4.權利要求1所述的修飾的T細胞，其中所述CAR的抗原結合結構域包括選自單克隆抗體、多克隆抗體、合成抗體、人抗體、人源化抗體、單結構域抗體、單鏈可變片段、和其抗原結合片段的抗體。

5.權利要求1所述的修飾的T細胞，其中所述CAR的抗原結合結構域特異性地結合靶細胞上的抗原。

6.權利要求1所述的修飾的T細胞，其中所述CAR的胞內結構域包括雙信號傳導結構域。

7.權利要求1所述的修飾的T細胞，進一步包括編碼共刺激分子的外源性核酸。

8.權利要求7所述的修飾的T細胞，其中所述共刺激分子選自CD3、CD27、CD28、CD83、CD86、CD127、4-1BB、4-1BBL、PD1和PD1L。

9.權利要求8所述的修飾的T細胞，其中所述CD3包括至少兩種不同的CD3鏈。

10.權利要求9所述的修飾的T細胞，其中所述不同的CD3鏈是CD3ζ鏈和CD3ε鏈。

11.用于生成修飾的T細胞的方法，其包括：

將能夠下調內源基因的基因表達的核酸引入T細胞，所述內源基因選自TCRα鏈、TCRβ鏈、β-2微球蛋白、HLA分子、CTLA-4、PD1和FAS；并且

引入編碼嵌合抗原受體(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受體(CAR)包括抗原結合結構域、跨膜結構域。

12.權利要求11所述的方法，其中能夠下調基因表達的所述核酸選自反義RNA、antigomer RNA、siRNA、shRNA和CRISPR系統。

13.權利要求12所述的方法，其中所述CRISPR系統包括pAd5/F35-CRISPR載體。

14.權利要求11所述的方法，其中所述CAR的抗原結合結構域包括選自單克隆抗體、多克隆抗體、合成抗體、人抗體、人源化抗體、單結構域抗體、單鏈可變片段、和其抗原結合片段的抗體。

15.權利要求11所述的方法，其中所述CAR的抗原結合結構域特異性地結合靶細胞上的抗原。

16.權利要求11所述的方法，其中所述CAR的胞內結構域包括雙信號傳導結構域。

17.權利要求11所述的方法，其中所述T細胞獲得自外周血單核細胞、臍帶血細胞、純化的T細胞群和T細胞系。

18.權利要求11所述的方法，其中所述方法進一步包括擴展所述T細胞。

19.權利要求18所述的方法，其中擴展所述T細胞的步驟包括使用選自flt3-L、IL-1、IL-3和c-kit配體的因子培養所述T細胞。