[發(fā)明專利]一種酶活提高的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶突變體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111341341.1
• 申請(qǐng)日: 2021-11-12
• 公開（公告）號(hào): CN114317474B
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖璐;段學(xué)武;江薰垣;萬凱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與監(jiān)測技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/54;C12N15/10;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 廣州科粵專利商標(biāo)代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星

1.谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶的突變體SlGST T1^K228A,R230A，其特征在于，氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示。

2.一種編碼權(quán)利要求1所述的突變體SlGST T1^K228A,R230A的基因。

3.一種含有權(quán)利要求2所述的編碼突變體SlGST T1^K228A,R230A的基因的重組表達(dá)質(zhì)粒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)質(zhì)粒，其特征在于，所述的表達(dá)質(zhì)粒是表達(dá)載體pET28a(+)。

5.一種含有權(quán)利要求3或4所述的重組表達(dá)質(zhì)粒的宿主表達(dá)細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的宿主表達(dá)細(xì)胞，其特征在于，所述的宿主表達(dá)細(xì)胞是大腸桿菌。

7.權(quán)利要求1所述的突變體SlGST T1^K228A,R230A在催化谷胱甘肽結(jié)合反應(yīng)中的應(yīng)用。

8.一種獲得突變體SlGST T1^K228A,R230A的編碼基因的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)以SlGST T1基因?yàn)槟０澹許EQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示序列為引物進(jìn)行PCR，得第一PCR產(chǎn)物，所述的SlGST T1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

(2)以第一PCR產(chǎn)物為模板，以SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.6所示序列為引物進(jìn)行PCR，得含酶切位點(diǎn)的突變體SlGST T1^K228A,R230A的編碼基因。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟(1)和(2)的PCR的程序?yàn)椋?8℃預(yù)變性3min；98℃變性10s、60℃退火20s、72℃延伸60s，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸5min。