[發明專利]賽拉嗪半抗原和人工抗原及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202111329116.6
• 申請日: 2021-11-10
• 公開（公告）號: CN113999188B
• 公開（公告）日: 2023-09-19
• 發明（設計）人: 溫凱;王戰輝;沈建忠;于雪芝;余文博;江海洋;張素霞;史為民;羅亮
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C07D279/06
• 分類號: C07D279/06;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/435;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/53
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發明公開了一種賽拉嗪半抗原和人工抗原及其制備方法與應用。用本發明的賽拉嗪人工抗原免疫動物，可以得到效價高，靈敏度高的特異性抗體。本發明提供的賽拉嗪半抗原及其制備的抗體，為建立快速、簡便、價廉、靈敏、特異的賽拉嗪檢測方法提供了新手段。利用本發明提供的半抗原與載體蛋白的偶聯物制備賽拉嗪抗體，制備過程簡單、經濟，抗體對賽拉嗪的檢測靈敏度可達0.25ng/mL，實用價值高，特別是在獸藥殘留檢測中具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物化工技術領域，具體地說，涉及賽拉嗪半抗原和人工抗原及其制備方法與應用。

背景技術

賽拉嗪(Xylazine，XYL)為鎮痛性化學保定藥，其作用機理是通過與中樞神經系統突觸前膜的受體結合,并激動突觸前膜的抑制性自身受體,抑制去甲腎上腺素的釋放,從而起到鎮靜、鎮痛和中樞性肌松作用。目前，該藥主要用于馬、牛、羊等動物的鎮靜與鎮痛。已有研究表明，賽拉嗪在動物源性食品中的殘留會對消費者的健康帶來極大危害，長期食用含有賽拉嗪殘留的動物源食品可能會出現惡心、嘔吐、頭暈，無力等癥狀，嚴重的還會出現精神失常。因此，開發可用于動物源性食品中的賽拉嗪殘留檢測方法，對有效控制動物源性食品中賽拉嗪的殘留，保障人民的健康具有重大意義。

目前，已有的賽拉嗪檢測方法主要包括高效液相色譜(HPLC)，液相色譜/串聯質譜(LC-MS)和氣相色譜/串聯質譜(GC-MS/MS)等。然而，這些方法所需的大型儀器價格昂貴、操作復雜、便攜性差，難以實現生產一線的檢測，并且這些方法的前處理過程較為復雜、費時，不適用于大量樣品的快速檢測。因此，有必要建立一種針對賽拉嗪的簡單、快速、可靠的檢測方法?；诳乖?抗體特異性反應的免疫分析技術，具有檢測速度快，檢測成本低的優點。然而，免疫分析技術的核心是獲得對賽拉嗪具有高特異性和高靈敏度的抗體，因此，合理設計賽拉嗪半抗原，開發一種簡單、快捷、用于檢測賽拉嗪的抗體顯得尤為重要。

發明內容

本發明的目的是提供賽拉嗪半抗原和人工抗原及其制備方法與應用。

為了實現本發明目的，第一方面，本發明提供一種賽拉嗪半抗原，其結構如式(I)或式(II)所示：

第二方面，本發明提供所述賽拉嗪半抗原的制備方法。

式(I)所示賽拉嗪半抗原的制備方法，包括如下步驟：

S1：將241.86mg?6-溴己酸加入到20mL二氯甲烷中，再加入5mL二氯亞砜，95-110℃回流反應1-3h(優選1h)，直接旋轉蒸發至干，滴加到10mL含有5％碳酸氫鈉的叔丁醇溶液中，室溫反應過夜，抽濾后倒入10mL?5％碳酸氫鈉水溶液中，30mL乙酸乙酯進行提取，旋轉蒸發至干；

S2：以N,N-二甲基甲酰胺作為溶劑，在20mL?N,N-二甲基甲酰胺中加入2.64g?6-溴己酸叔丁酯和3.16g賽拉嗪，再加入2.70g碳酸鉀和1.23g碘化鉀，95-125℃(優選100℃)反應過夜后直接倒入水中，使用30mL乙酸乙酯提取，旋轉蒸發至干，利用硅膠柱進行純化，收集產物；

S3：將S2所得產物溶于20mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，室溫反應2-4h(優選2h)，濃縮至恒重，倒入水中，使用20mL二氯甲烷進行提取，干燥旋干二氯甲烷，即得。

式(II)所示賽拉嗪半抗原的制備方法，包括如下步驟：

(1)將6.42g?4-溴甲基苯甲酸加入到5mL二氯亞砜中，80-100℃回流反應1-3h(優選1h)，直接旋轉蒸發至干，滴加到10mL含有5％的碳酸氫鈉的叔丁醇溶液中，室溫反應過夜，抽濾后倒入8mL?5％碳酸氫鈉水溶液中，30mL乙酸乙酯提取，旋干；