[發明專利]一種表達TVA的小鼠模型的構建方法和應用

在審

• 申請號: 202111325591.6
• 申請日: 2021-11-10
• 公開（公告）號: CN114085872A
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發明（設計）人: 林坤章;韓增鵬;駱能松;徐富強
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N15/65;C12N15/62;A01K67/027
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈;李玉娜

本發明公開了一種表達TVA的小鼠模型的構建方法和應用。該方法包括：1)構建表達核定位綠色熒光和TVA受體的腺相關病毒載體；2)制備表達核定位綠色熒光和TVA受體的重組腺相關病毒；3)重組腺相關病毒通過尾靜脈注射到小鼠體內，獲得表達TVA的小鼠模型。本發明通過尾靜脈注射進行全腦補償TVA受體的方式構建表達TVA的小鼠模型，屬于首次公開，比傳統的轉基因方法更靈活，周期短，應用更方便，成本更低。構建得到的表達TVA的小鼠模型可以使EnvARVG包裝的SAD?B19?ΔG?DsRed病毒有效地標記全腦上游直接輸入網絡，在特定腦區的結構與功能解析、疾病模型建立和基因治療評估等方面具有廣泛的應用價值和市場前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種表達TVA的小鼠模型的構建方法和應用。

背景技術

大腦神經網絡結構連接極其復雜，其異常往往導致各種腦疾病的發生，如帕金森、自閉癥、阿爾茲海默癥等，給家庭和社會帶來沉重的負擔。因此，各種高效逆行標記神經網絡的工具病毒載體被開發，在神經環路結構與功能解析中扮演重要角色，但它們的標記特性差異大。補償受體可以提高病毒載體的逆行標記效率，如局部TVA受體補償可輔助EnvARVG包裝的病毒有效地標記單一的上游直接輸入網絡，但缺乏理想的表達TVA受體的小鼠模型用于輔助EnvARVG包裝的病毒有效地標記全腦上游直接輸入網絡。雖然可以制備表達TVA的轉基因小鼠，但由于其價格高、試驗周期長、操作不便等問題，并不是動物模型的理想選擇

發明內容

為了解決現有技術中的不足，本發明的目的是提供一種表達TVA的小鼠模型的構建方法和應用。具體方案如下：

本發明第一方面提供一種表達TVA的小鼠模型的構建方法，包括如下步驟：

1)構建表達核定位綠色熒光和TVA受體的腺相關病毒載體；

2)制備表達核定位綠色熒光和TVA受體的重組腺相關病毒；

3)重組腺相關病毒通過尾靜脈注射到小鼠體內，獲得表達TVA的小鼠模型。

進一步地，所述表達核定位綠色熒光和TVA受體的腺相關病毒載體的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

進一步地，所述重組腺相關病毒為重組PHP.eB型腺相關病毒。

進一步地，表達核定位綠色熒光和TVA受體的重組腺相關病毒的制備，具體操作為：將表達核定位綠色熒光和TVA受體的腺相關病毒載體與PHP.eB血清型AAV衣殼質粒pUCmini-iCAP-PHP.eB、腺病毒元件輔助質粒pAd-Helper按質粒分子數1：1：1共轉染HEK-293T細胞，分別收集上清和沉淀，利用碘克沙醇密度梯度離心法純化病毒，獲得重組腺相關病毒。

本發明第二方面提供所述構建方法構建得到的表達TVA的小鼠模型。

本發明第三方面提供所述表達TVA的小鼠模型在神經網路逆行標記、特定腦區的結構與功能解析、疾病模型建立和基因治療評估中的應用。

本發明第四方面提供一種全腦上游直接輸入網絡標記的方法，包括步驟：在表達TVA的小鼠模型的特定腦區注射EnvARVG包裝的SAD-B19-ΔG-DsRed病毒，即可實現全腦上游直接輸入網絡的標記。

本發明的有益效果為：

1、本發明通過尾靜脈注射進行全腦補償TVA受體的方式構建表達TVA的小鼠模型，屬于首次公開，比傳統的轉基因方法更靈活，周期短，應用更方便，成本更低。

2、本發明公開的表達TVA的小鼠模型可以使EnvARVG包裝的SAD-B19-ΔG-DsRed病毒有效地標記全腦上游直接輸入網絡，在特定腦區的結構與功能解析、疾病模型建立和基因治療評估等方面具有廣泛的應用價值和市場前景。

附圖說明

圖1為重組表達載體圖譜。