[發明專利]用于鑒別煙草尼古丁含量高低的分子標記nicas1及其試劑盒與應用

在審

• 申請號: 202111324714.4
• 申請日: 2021-11-10
• 公開（公告）號: CN113846180A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 謝賀;白戈;李勇;楊愛國;逄濤;楊大海;肖炳光;李永平;任民;費明亮
• 申請（專利權）人: 云南省煙草農業科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 向群

1.用于鑒別煙草尼古丁含量高低的分子標記Nicotine Associated SNP 1，其特征在于，為位于煙草基因組版本Nitab v4.5 Genome Scaffolds Edwards2017的第0002539號基因組片段第95304位的SNP位點Nitab4.5_0002539:95304A/G。

2.根據權利要求1所述的用于鑒別煙草尼古丁含量高低的分子標記NicotineAssociated SNP 1，其特征在于，所述用于鑒別煙草尼古丁含量高低的分子標記NicotineAssociated SNP 1的特異性引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.用于鑒別煙草尼古丁含量高低的試劑盒，其特征在于，包括：分子標記NicotineAssociated SNP 1；所述分子標記Nicotine Associated SNP 1為位于煙草基因組版本Nitab v4.5 Genome Scaffolds Edwards2017的第0002539號基因組片段第95304位的SNP位點Nitab4.5_0002539:95304A/G。

4.根據權利要求3所述的用于鑒別煙草尼古丁含量高低的試劑盒，其特征在于，還包括：分子標記Nicotine Associated SNP 1的特異性引物；和/或，所述分子標記NicotineAssociated SNP 1的特異性引物如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

和/或，所述試劑盒還包括：用于PCR的試劑、用于測序的試劑、和/或，用于KASP基因分型檢測的試劑；

和/或，所述用于PCR的試劑包括：dNTPs、Taq酶、PCR緩沖液、ddH₂O；

和/或，所述用于測序的試劑包括：Tris-HCl、瓊脂糖、EB；

和/或，所述KASP基因分型檢測的試劑包括：KASP Master mix。

5.一種鑒別煙草尼古丁含量高低的方法，其特征在于，采用分子標記NicotineAssociated SNP 1對待測煙草材料進行篩選；所述分子標記Nicotine Associated SNP 1位于煙草基因組版本Nitab v4.5 Genome Scaffolds Edwards2017第0002539基因組片段第95304位的SNP位點Nitab4.5_0002539:95304A/G。

6.根據權利要求5所述的一種鑒別煙草尼古丁含量高低的方法，其特征在于，包括：采用所述分子標記Nicotine Associated SNP 1的特異性引物對待測煙草材料的DNA進行PCR擴增；所述分子標記Nicotine Associated SNP 1的特異性引物如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示；

和/或，所述一種鑒別煙草尼古丁含量高低的方法還包括：所述PCR擴增產物進行測序或KASP基因分型檢測；

和/或，測序結果或KASP檢測結果顯示SNP位點基因型為GG對應的待測煙草材料為尼古丁含量低的煙草材料；

測序結果或KASP檢測結果顯示SNP位點基因型為AA對應的待測煙草材料為尼古丁含量高的煙草材料；

和/或，所述PCR擴增的反應體系包括：

模板0.02μL/μL、正向引物0.02μL/μL、反向引物0.02μL/μL、5×buffer 0.2μL/μL、dNTPmixture 0.02μL/μL、DNA聚合酶0.02μL/μL、其余為水；

PCR擴增的反應程序包括：98℃5min；以98℃30s、58℃30s、72℃30s為1個循環，共35個循環；72℃5min；

和/或，所述待測煙草材料的DNA提取自煙草的葉片、種子、根、莖、花、或果實。