[發(fā)明專利]一種基于FRET的turn-on型多西環(huán)素特異性均相檢測(cè)體系及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111323806.0
• 申請(qǐng)日: 2021-11-10
• 公開（公告）號(hào): CN114047330A
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬立才;秦譽(yù);邢維維;丁亞芳;劉河冰;劉薇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京維德維康生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/53
• 分類號(hào): G01N33/53;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于FRET的turn-on型多西環(huán)素特異性均相檢測(cè)體系，其特征在于，由含有mTetR修飾的Tb供體Tb-mTetR和tetO修飾QD受體QD-tetO組成。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于FRET的turn-on型多西環(huán)素特異性均相檢測(cè)體系，其特征在于，所述tetO的堿基序列為：

tetO-F 5'-GTTATTTTACCACTCCCTATCAGTGATAGAGAAAA-3'，如SEQ ID NO.1所示，

tetO-R 5'-TCTATCACTGATAGGGAGTGGTAAAATAACTTTTTTTTTTT-biotin-3'，如SEQ IDNO.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于FRET的turn-on型多西環(huán)素特異性均相檢測(cè)體系，其特征在于，所述QD-tetO為QD和tetO在緩沖液中混勻后，經(jīng)反應(yīng)、洗滌、溶解獲得的。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于FRET的turn-on型多西環(huán)素特異性均相檢測(cè)體系，其特征在于，所述mTetR為根據(jù)mTetR氨基酸序列進(jìn)行大腸桿菌密碼子偏好性優(yōu)化得到的，所述mTetR堿基序列為：

ATGTCTCGTCTGGACAAAAGCAAAGTTATCAACTCCGCACTGGAACTGCTGAACGAAGTTGGTATCGAGGGTCTGACGACCCGTAAACTGGCACAGAAACTGGGCGTTGAACAGCCTACTCTGTACTGGCATGTTAAAAACAAACGTGCACTGCTGGATGCGCTGGCTGTCGAAATTCTGGCTCGTCACCATGATTACAGCCTGCCTGCTGCGGGCGAATCTTGGCAGAGCTTCCTGCGTAACAATGCAATGTCCTTCCGTCGCGCTCTGCTGCGTTACCGTGACGAAGCGAAAGTACATCTGGGCACCCGCCCGGATGAAAAACAGTATGACACCGTCGAAACCCAGCTGCGTTTTATGACCGAAAACGGTTTCTCCCTGCGTGACGGTCTGTACGCAATCTCTGCGGTTAGCCATTTCACCCTGGGCGCTGTACTGGAACAGCAAGAACACACCGCGGCACTGACTGATCGTCCGGCGGCGCCGGACGAAAACCTGCCGCCGCTGCTGCGCGAAGCACTGCAGATCATGGACAGCGATGACGGCGAGCAGGCGTTCCTGCACGGTCTGGAGTCCCTGATCCGTGGCTTCGAAGTGCAGCTGACTGCTCTGTCTCAGATCGTG，如SEQ ID NO.3所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于FRET的turn-on型多西環(huán)素特異性均相檢測(cè)體系，其特征在于，所述mTetR擴(kuò)增引物序列為：

BamHI-mTetR-F：5'-CGGGATCCGATGTCTCGTCTGGACAAAAGC-3'，如SEQ ID NO.4所示，

XhoI-mTetR-R：5'-CCGCTCGAGCACGATCTGAGACAGAGCAGTC-3'，如SEQ ID NO.5所示,

其中：BamHI-mTetR-F下劃線顯示的部分為BamHI酶切識(shí)別序列；XhoI-mTetR-R下劃線顯示的部分為XhoI酶切識(shí)別序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于FRET的turn-on型多西環(huán)素特異性均相檢測(cè)體系，其特征在于，所述Tb-mTetR為Tb-NHS與mTetR混勻后，經(jīng)反應(yīng)、純化、洗滌、透析得到的。