[發明專利]一種芒萁原葉體快速培育成成熟孢子體的方法

在審

• 申請號: 202111317843.0
• 申請日: 2021-11-08
• 公開（公告）號: CN113892429A
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 楊杰芳;劉麗婷;張港隆;龔春;汪雁楠;賈全全;熊振宇;楊嘉麒
• 申請（專利權）人: 廣州悅達林業有限責任公司;江西省林業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G31/00;A01G24/28;A01G24/20;A01G24/00
• 代理公司: 南昌邁恩知識產權代理事務所(普通合伙) 36139
• 代理人: 徐克寒

1.一種芒萁原葉體快速培育成成熟孢子體的方法，其特征在于，所述方法以芒萁原葉體材料作為繁育基礎材料，培育過程采用組培和設施栽培相結合的形式，所述方法包括以下過程：

(1)原葉體發育萌動：將芒萁原葉體材料發育誘導形成萌動的原葉體；

(2)原葉體發育成熟：將萌動的原葉體材料誘導培養成成熟原葉體團或成熟原葉體；

(3)成熟原葉體生成幼孢子體：

將成熟原葉體團分散成單個成熟原葉體，或者2至3個成熟原葉體組成的小團；

設施栽培條件下誘導幼孢子體生成：將單個芒萁成熟原葉體，或者2至3個成熟原葉體組成的小團撒播到誘導培養基中；覆膜保溫35℃～40℃培養2個星期，期間澆施特定營養水1次；灑水壺澆水，保證培養基質中原葉體上每3至5天有水滴流動，環境為遮光50％，室溫；

(4)幼孢子體發育成成熟孢子：

將幼孢子體通過設施栽培或大田栽培，采用特定培養基質；

依據孢子體生長勢，施加野外芒萁根系和土壤浸出液；

每個月澆施一次特定芒萁根系混合水，同時依據孢子體生長勢常規施肥。

2.根據權利要求1所述的一種芒萁原葉體快速培育成成熟孢子體的方法，其特征在于，

所述步驟(1)中的芒萁原葉體為通過組培得到的無菌原葉體材料，即原葉體綠色小球體，或無菌條件下芒萁孢子萌發形成的未發育成熟的原葉體，即細小不規則片狀原葉體；

所述步驟(1)具體為：將原葉體綠色小球體在無菌條件下分散成0.5mm至1.0mm粒徑的小原葉體球；再將小原葉體球轉接到原葉體發育誘導培養基中進行原葉體的發育誘導，在無菌培養環境下培養3周，得到萌動的原葉體團；或將孢子萌發出的細小不規則片狀原葉體轉接到發育誘導培養基，無菌培養3周，得到萌動的單個原葉體。

培養光照強度為2000-3000LX，光照時間為12h/d，溫度為23±3℃；

所述原葉體發育誘導的培養基為1/8MS+蔗糖15g/L+瓊脂5.6g/L，pH5.4-5.8。

3.根據權利要求1所述的一種芒萁原葉體快速培育成成熟孢子體的方法，其特征在于，所述步驟(2)具體為：將經發育誘導后萌動的原葉體或原葉體團，轉接到原葉體發育培養基中進行原葉體的發育培養，在無菌培養環境下培養周，得到芒萁成熟原葉體或成熟原葉體團，發育成熟的原葉體直徑大小1～3cm，心形葉片狀，有須根；

培養光照強度為2000-3000LX，光照時間為12h/d，溫度為23±3℃；

所述原葉體發育培養基為1/2MS+1mg/L NAA+蔗糖15g/L+瓊脂5.6g/L，pH5.4-5.8。

4.根據權利要求1所述的一種芒萁原葉體快速培育成成熟孢子體的方法，其特征在于，所述步驟(3)中所述特定營養水配方為：1/2MS+1mg/L NAA++蔗糖30g/L，pH5.4-5.8；所述誘導培養基為V_草炭∶V_蛭蟲∶V_腐殖土＝1∶1∶1。

5.根據權利要求1所述的一種芒萁原葉體快速培育成成熟孢子體的方法，其特征在于，所述步驟(4)中所述特定培養基質為V_草炭∶V_蛭蟲∶V_腐殖土＝1∶1∶1；

所述特定芒萁根系混合水是指混合了野生芒萁根系土壤、芒萁根粉碎物的混合水；

所述野外芒萁根系和土壤浸出液是指野外生長良好的芒萁植株根系土壤、腐殖層和水的混合物。