[發(fā)明專利]肺炎克雷伯菌莢膜多糖解聚酶及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111315964.1
• 申請(qǐng)日: 2021-11-09
• 公開（公告）號(hào): CN113755469B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 祝先潮;何平;胡付品;馬瑞景;徐磊;毛意芝;方紅燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海瑞宙生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/18
• 分類號(hào): C12N9/18;C12N15/56;C12P19/14;A61K38/46;A61P31/04
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

本發(fā)明提供了肺炎克雷伯菌莢膜多糖解聚酶及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的肺炎克雷伯菌莢膜多糖解聚酶能夠有效分解K19型肺炎克雷伯菌胞外多糖和莢膜，從而利于能夠殺傷肺炎克雷伯菌的藥物或免疫細(xì)胞與肺炎克雷伯菌進(jìn)行接觸，進(jìn)而發(fā)揮藥效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及肺炎克雷伯菌莢膜多糖解聚酶及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

肺炎克雷伯菌是一種常見的機(jī)會(huì)致病菌，也是一種重要的醫(yī)源性感染病原體。2018年1-6月流行病學(xué)調(diào)查顯示，肺炎克雷伯菌在主要臨床分離菌種中占近14%，僅次于大腸埃希菌，位居第二。且歷年主要革蘭陰性桿菌分離率研究中發(fā)現(xiàn)，肺炎克雷伯菌分離率呈現(xiàn)升高趨勢(shì)。其可定植于口腔、皮膚、腸道等部位，可引起包括敗血癥、肺炎、尿路感染、具有重要臨床研究?jī)r(jià)值。

由于近年來(lái)臨床大量使用抗生素，多種細(xì)菌產(chǎn)生了多重耐藥現(xiàn)象，包括肺炎克雷伯菌，主要表現(xiàn)為產(chǎn)廣譜β-內(nèi)酰胺酶和碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌株。其中，細(xì)菌生物被膜的產(chǎn)生大大提高了細(xì)菌抵御抗生素的能力。肺炎克雷伯菌能夠合成多糖，在細(xì)菌周圍形成莢膜多糖或分泌為胞外多糖，形成一種自然生物膜。該生物膜既可以作為包裹細(xì)菌體的物理屏障，抵御噬菌體或其他有害物質(zhì)的攻擊，也能夠減輕抗生素的滲透，并一定程度上抵抗宿主的免疫系統(tǒng)。因此，生物膜的形成在細(xì)菌感染中具有重要意義。對(duì)抗生物膜發(fā)展對(duì)于減輕細(xì)菌耐藥性是十分必要的。

噬菌體是一類能夠感染細(xì)菌等微生物的病毒，部分可引起宿主菌的裂解。噬菌體衍生的莢膜解聚酶在肺炎克雷伯菌感染的治療中得到了諸多關(guān)注。莢膜解聚酶能夠分解細(xì)菌的莢膜多糖，破壞宿主菌的莢膜屏障，增加其對(duì)抗生素和免疫攻擊的敏感性。

在一項(xiàng)全國(guó)成人碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌（CRKP）莢膜多糖血清型研究中發(fā)現(xiàn)，其血清型中K47 和K64 型兩型總共僅占全部成人CRKP的61%-76%左右。其余如K19型等也占有一定的比例。然而，由于噬菌體的宿主譜特異性，早期發(fā)現(xiàn)的解聚酶并無(wú)法對(duì)K19莢膜型CRKP產(chǎn)生滿意的莢膜裂解作用。

因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的可高效或特異降解K19肺炎克雷伯菌莢膜多糖的解聚酶。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供可高效或特異降解肺炎克雷伯菌莢膜多糖的解聚酶及其應(yīng)用。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離的解聚酶，所述的解聚酶為：

(a) 具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽；或

(b) 將SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的多肽經(jīng)過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信號(hào)肽序列后形成的、并具有肺炎克雷伯菌莢膜多糖解聚酶活性的衍生多肽。

在本發(fā)明的另一方面，提供了一種分離的解聚酶，所述的解聚酶選自下組：

(a) 具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽；

(b) 將SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽經(jīng)過(guò)一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信號(hào)肽序列后形成的、并具有肺炎克雷伯菌莢膜多糖解聚酶活性的衍生多肽；

(c) 氨基酸序列與SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的同源性≥85%(較佳地≥95%)，并具有肺炎克雷伯菌莢膜多糖解聚酶活性的衍生多肽；

(d) 序列中含有(a)、(b)或(c)中所述多肽序列的衍生多肽。

在另一優(yōu)選例中，所述的解聚酶為多糖解聚酶。

在另一優(yōu)選例中，所述的序列(d)為由(a)、(b)或(c)添加了標(biāo)簽序列、信號(hào)序列或分泌信號(hào)序列后所形成的融合蛋白。

在另一優(yōu)選例中，所述的解聚酶具有SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列。