[發(fā)明專利]一種HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境特征的分析方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111314462.7
• 申請(qǐng)日: 2021-11-08
• 公開（公告）號(hào): CN114113012B
• 公開（公告）日: 2023-06-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈琳;趙興旺
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京市腫瘤防治研究所
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京萬思博知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11694
• 代理人: 劉冀

本發(fā)明公開了一種HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境特征的分析方法及應(yīng)用，該方法以HER2陽性胃癌患者的活檢病理切片為為分析載體，通過對(duì)病理切片免疫微環(huán)境中的細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色示蹤定位，通過分析腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞之間，或者不同免疫細(xì)胞類型之間的細(xì)胞核間距，捕捉HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境特征。為HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境的研究提供技術(shù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請(qǐng)涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體而言，涉及一種HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境特征的分析方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

胃癌是我國(guó)第二大癌癥，發(fā)病率和死亡率高于全球平均水平。中國(guó)胃癌患者占全球胃癌患者數(shù)量的48％。與此同時(shí)，中國(guó)早期胃癌診治率低，僅有15％左右，80％-90％的患者診斷時(shí)已經(jīng)進(jìn)展為晚期，由于治療方法有限，這類患者預(yù)后較差，巨大的臨床需求得不到滿足。HER2陽性胃癌是一類特殊類型的胃癌。多項(xiàng)國(guó)外大樣本研究分析表明，胃癌中HER2的陽性率為7.3％-20.2％。國(guó)內(nèi)多中心研究數(shù)據(jù)顯示，中國(guó)胃癌患者的HER2陽性率為12％-13％。HER2的突變與擴(kuò)增，可激活下游的兩個(gè)主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑：MAPK通路，PI3K/Akt通路，從而引發(fā)連鎖反應(yīng)，調(diào)節(jié)凋亡等相關(guān)基因，促進(jìn)細(xì)胞無限增值分化，抑制凋亡，發(fā)生癌變。此外，HER2的過表達(dá)，信號(hào)通路的激活，會(huì)協(xié)同TGF-β促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化現(xiàn)象(EMT，epithelial-mesenchymaltransition)和腫瘤細(xì)胞遷移相關(guān)的基因的表達(dá)，促進(jìn)癌變進(jìn)程。通過TGF-β通路實(shí)現(xiàn)對(duì)免疫微環(huán)境的調(diào)控。目前對(duì)HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境的研究比較少，缺乏有效的分析模型與方法。亟待建立一種分析方法可以相對(duì)系統(tǒng)的評(píng)價(jià)出HER2陽性晚期胃癌免疫微環(huán)境中免疫細(xì)胞的極性化分布特征。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境特征的分析方法，所述方法以HER2陽性胃癌患者的活檢病理切片為分析載體，通過對(duì)病理切片免疫微環(huán)境中的細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色示蹤定位，通過分析腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞之間，或者不同免疫細(xì)胞類型之間的細(xì)胞核間距，捕捉HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境特征；所述免疫微環(huán)境中的細(xì)胞包括胃粘膜上皮細(xì)胞、HER2表達(dá)陽性上皮細(xì)胞，NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、Treg細(xì)胞和CTL細(xì)胞。

進(jìn)一步的，以0-10微米、10-20微米、20-30微米為統(tǒng)計(jì)分析維度，作為細(xì)胞之間的共定位互作的細(xì)胞核間距離衡量范圍，并通過進(jìn)行空間距離聚類分析，計(jì)算具有指定距離臨近細(xì)胞相匹配的細(xì)胞數(shù)量，并歸一化為在該細(xì)胞總類型中所占比率，以此來計(jì)算細(xì)胞類型的有效百分比，捕捉所述HER2陽性胃癌免疫微環(huán)境特征。

所述方法具體包括如下步驟：

(1)對(duì)HER2陽性胃癌患者的活檢病理切片進(jìn)行HE染色，確定發(fā)生癌變的腫瘤核心區(qū)域和非癌變的癌旁區(qū)域；

(2)病理免疫微環(huán)境中細(xì)胞的熒光染色示蹤與定位，所述細(xì)胞包括胃粘膜上皮細(xì)胞、HER2表達(dá)陽性上皮細(xì)胞，NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、Treg細(xì)胞和CTL細(xì)胞；

(3)對(duì)免疫熒光標(biāo)記后的切片樣本進(jìn)行全景掃描，并對(duì)照HE染色的病理區(qū)域劃分，對(duì)癌變區(qū)域進(jìn)行精細(xì)掃描；

(4)對(duì)癌變區(qū)域的圖像進(jìn)行亞微結(jié)構(gòu)的精細(xì)拆分、細(xì)胞類型區(qū)別、蛋白Marker表達(dá)相對(duì)定量分析；

(5)免疫細(xì)胞極性化分布特征的分析，包括對(duì)微環(huán)境中能夠與腫瘤上皮細(xì)胞共定位的CTL細(xì)胞、NK細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞、B細(xì)胞、Treg細(xì)胞各自所占比率進(jìn)行分析，以及對(duì)微環(huán)境中與NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞共定位的CTL細(xì)胞所占比率和與Treg細(xì)胞、M2巨噬細(xì)胞共定位的B細(xì)胞所占比率進(jìn)行分析。

其中，所述步驟(1)中，所述病理切片厚度為4微米。