[發明專利]一種可擴增間充質干細胞的無血清培養基及其制備方法

在審

• 申請號: 202111301022.8
• 申請日: 2021-11-04
• 公開（公告）號: CN113943701A
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 徐單單;陳素紅;王霞;黃慧清
• 申請（專利權）人: 廣東食品藥品職業學院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 陸豐艷

本發明屬于檢測領域，具體涉及一種可擴增間充質干細胞的無血清培養基及其制備方法。主要含有姜黃素、千金藤堿、小檗堿、白藜蘆醇、花青素、骨形態蛋白4，β?甘油磷酸、膽固醇、異丁甲基黃嘌呤、EGF、生物素、aFGF、肝素鈉、還原型谷胱甘肽、轉鐵蛋白、胰島素、抗壞血酸、地塞米松、白介素2、維生素B12、白介素6、干細胞因子、煙酰胺、TGF?β3、血小板生成素、牛磺酸、羅格列酮、FMS樣酪氨酸激酶3配體、IGF2、丙酮酸鈉、GM?CSF和TPO等組分，該無血清培養基不僅具備體外擴增來源于脂肪、胎盤、骨髓、臍帶間充質干細胞的能力，還可保持干細胞自我更新、防止其分化，抑制其癌變。

技術領域

本發明屬于檢測方法領域，具體涉及一種可擴增間充質干細胞的無血清培養基及其制備方法。

背景技術

間充質干細胞(mesenchymaLstemceLLs，MSCs)是一種成體干細胞，具有高度的自我更新、多向分化潛能、低免疫原性、來源豐富等諸多優點，因此得到組織工程和再生醫學的高度重視與青睞，是目前再生醫學中常用的細胞。

MSCs來源于骨髓、外周血、臍帶血、胎盤等組織，是一類具有高度自我更新和多向分化潛能的成體干細胞。在不同的誘導條件下，其可分化為多種組織細胞，并具有造血支持、免疫調節、組織修復等作用，它可分泌多種細胞因子及生長因子，促進造血干細胞的增殖與分化。MSCs還具有免疫調節、抗炎、組織修復作用，可減輕移植物抗宿主病及其他移植相關并發癥。

干細胞治療目前在全球開展了多項臨床試驗，覆蓋140多種疾病，其中包括不同種干細胞類型及多種疾病類型，主要包括心腦血管疾病、骨科疾病、神經系統疾病、呼吸系統疾病、肝病、風濕免疫病、免疫排斥等，是治療多種疾病的種子細胞。2015年7月31日，國家衛生計生委辦公廳、國家食品藥品監管總局辦公廳發布的《干細胞制劑質量控制及臨床前研究指導原則(試行)》中指出，MSCs制劑作為一種新型生物治療產品，其在細胞質量、安全性和生物學效應方面都應進行全面的研究及質量控制。

間充質干細胞的擴增有賴細胞因子、小分子化合物等組合，通過研究往無血清培養基添加細胞因子、小分子化合物保持其增殖能力的同時阻止其分化，解決擴增間充質干細胞的難題。目前間充質干細胞的體外擴增主要有向培養基中加入一定量的動物來源成分，如胎牛血清。但是，動物來源成分往往含有一定量的免疫原成分或者病原微生物，這些外源物會引起病人嚴重的免疫反應，危害病人的健康，影響干細胞移植效果，最終可能造成干細胞移植的失敗。

中國專利申請CN112662624 A公布了一種用于骨髓間充質干細胞體外培養和擴增的無血清培養基，其特征在于，為一種水溶液，其組分及其含量如下：基礎培養基20-40g/L，生長因子5-15ng/mL，紅茶菌發酵液8-22mg/mL，血清蛋白質3-20mg/mL，硒代蛋氨酸1-10ng/mL，阿魏酸鈉0.1-0.4mg/mL，二甲雙胍3-8ng/mL，3'-脫氧煙酰胺腺嘌呤二核苷酸5-12ng/mL，L-谷氨酰胺150mg/L-550mg/L，復合維生素30-110μM，胰島素12mU/L-24mU/L。然此發明中所含的二甲雙胍會干擾維生素的吸收，造成營養不均。

因此急需研制一種無動物來源成分的可擴增間充質干細胞的無血清培養基，在促進間充質干細胞擴增、阻止其分化，使脂肪、骨髓、胎盤、臍帶血造血干細胞在體外擴增的同時依然保持細胞多向分化的能力以外，確保無外源物會引起病人嚴重的免疫反應，從而影響干細胞移植效果。

發明內容

本發明旨在提供一種無動物來源成分的可擴增間充質干細胞的無血清培養基，促進其擴增、阻止其分化，使脂肪、骨髓、胎盤、臍帶血造血干細胞在體外擴增的同時依然保持細胞多向分化的能力。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供了一種擴增間充質干細胞的無血清培養基，包括以下組分及其濃度：