[發(fā)明專利]一種檢測(cè)BK病毒和JC病毒的試劑及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111298569.7
• 申請(qǐng)日: 2021-11-04
• 公開（公告）號(hào): CN113999937A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱同玉;曹懿睿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12Q1/6883
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩;張業(yè)民

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)BK病毒和JC病毒的試劑及應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。BKV和JCV高度保守區(qū)中存在一段JCV片段缺口的區(qū)域。通過在缺口區(qū)域以外適合位置設(shè)計(jì)同時(shí)靶向BKV和JCV的引物探針體系，且僅在缺口區(qū)域設(shè)計(jì)反向引物特異性靶向BKV或JCV。通過本發(fā)明用于初篩，同時(shí)靶向BKV和JCV，有利于節(jié)約資源；且又可精準(zhǔn)判斷BKV或JCV，適合臨床推廣。通過本發(fā)明可預(yù)防BKV和JCV活化和及時(shí)評(píng)估相關(guān)疾病的治療效果，彌補(bǔ)現(xiàn)有檢測(cè)體系的缺陷和不足，使檢測(cè)結(jié)果更加可靠。本發(fā)明兼顧BKV和JCV，可同時(shí)靶向二者進(jìn)行初篩，且又可精準(zhǔn)判斷BKV或JCV，有利于及時(shí)的免疫抑制調(diào)整。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)BK病毒和JC病毒的試劑及應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

多瘤病毒是常見的機(jī)會(huì)性病毒，人群攜帶率高。常在人類兒童時(shí)期建立感染并潛伏，待人體免疫力低下時(shí)活化并引起相關(guān)疾病。其中BK病毒和JC病毒(BKV和JCV)是最早發(fā)現(xiàn)和最被熟知的人多瘤病毒。BKV人群攜帶率超過85％，在免疫力正常的人群中并不發(fā)病。而對(duì)于免疫抑制劑服用者(如器官移植受者、自身免疫病患者等)、艾滋病患者等免疫力低下的人群、孕婦和老人，BKV可能導(dǎo)致嚴(yán)重的泌尿系統(tǒng)疾病，如能引起6％的腎移植受者發(fā)生多瘤病毒相關(guān)腎病(PyVN)，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致移植腎喪失功能；能引起大約10％的造血干細(xì)胞移植受者發(fā)生出血性膀胱炎，且無有效的抗BKV藥物。因此，BKV的早期診斷對(duì)于預(yù)防BKV相關(guān)疾病的發(fā)生至關(guān)重要。其中，熒光探針法實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)診斷是臨床上應(yīng)用普遍的BKV定量診斷方法。BKV的基因組分為早期編碼區(qū)(含LT和sT基因)、晚期編碼區(qū)(含Agno、VP1、VP2和VP3基因)和非編碼調(diào)控區(qū)(NCCR)。除NCCR外，編碼區(qū)均被用于設(shè)計(jì)qPCR診斷的靶區(qū)域。但已申請(qǐng)專利的有些引物探針體系需要優(yōu)化，有些靶向區(qū)域有待優(yōu)化。

JCV常在艾滋病患者中引起進(jìn)行性白質(zhì)腦病(PML)，死亡率高，臨床亦缺乏有效的抗病毒手段。JCV在腎移植患者中引起的PML也有報(bào)道，大約5％的多瘤病毒相關(guān)腎病由BKV以外的多瘤病毒(尤其是JCV)導(dǎo)致。BKV引起的PML也有報(bào)道。BKV和JCV的序列相似度高達(dá)75％，且均可在人體尿液、血液和腦脊液樣本中分布。因此，設(shè)計(jì)qPCR體系時(shí)需充分考慮靶標(biāo)和特異性。對(duì)于初篩來說，同時(shí)靶向BKV和JCV的體系有利于節(jié)約資源；對(duì)于精準(zhǔn)判斷BKV或JCV相關(guān)疾病，就需要特異的qPCR體系。因此，本發(fā)明僅通過反向引物選擇便可兼顧這兩種情況，適合臨床推廣。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為解決如何通過變換反向引物而同時(shí)靶向或分別靶向BKV和JCV以定量診斷的技術(shù)問題。

為達(dá)到解決上述問題的目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是提供一種同時(shí)檢測(cè)BK病毒和JC病毒的PCR試劑，包括通用正向引物，還包括同時(shí)靶向BK病毒和JC病毒的反向引物，反向引物的核苷酸序列為SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：3為gttggggccatcttcatatg。

本發(fā)明提供一種能同時(shí)靶向BK病毒和JC病毒，且能分別判斷BK病毒或JC病毒的PCR試劑，包括通用正向引物，還包括同時(shí)靶向BK病毒和JC病毒的反向引物，核苷酸序列為SEQ ID NO：3，SEQ ID NO：3為gttggggccatcttcatatg；靶向BK病毒的反向引物，核苷酸序列為SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：4為ttggctttttgggagctg；靶向JC病毒的反向引物，核苷酸序列為SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：5為gggtccttcctttctcct。

本發(fā)明提供一種上述PCR試劑在制備檢測(cè)BK病毒和/或JC病毒的診斷試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供一種上述PCR試劑在制備與BK病毒和/或JC病毒相關(guān)疾病的預(yù)后試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供一種上述PCR試劑在非診斷方法和非治療方法中的應(yīng)用。

相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果：