[發明專利]一種擬胚體生產方式、容器以及裝置

有效

• 申請號: 202111297245.1
• 申請日: 2021-11-04
• 公開（公告）號: CN114058504B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 張訸;葛文雪;陳濤濤;王嘉顯
• 申請（專利權）人: 南京艾爾普再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/24;C12M1/04;C12M1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物技術領域，涉及一種擬胚體生產方式、容器以及裝置，所述生產方式包括如下步驟：獲取用于生產擬胚體的容器，所述容器具有一環形側面；獲取待培養為擬胚體的細胞；向所述容器中加入待培養的細胞與用于培養細胞的培養液；外力驅動所述容器繞自身中心軸線轉動，以保證所述容器的環形側面具有相近的線速度。本申請的技術方案不改變容器容積，實現了擬胚體的大量生產。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種擬胚體生產方式、容器以及裝置。

背景技術

擬胚體是胚胎干細胞（ES）或誘導多能干細胞（iPS)在體外一定的培養條件下形成的，具有內、中、外三胚層結構，形態學上與哺乳動物早期的胚胎發育階段有著很高相似度的一種球狀結構，稱為擬胚體（Embryoidbodies，EBs）。目前很多分化系統都是基于擬胚體分化體系建立的，如造血干細胞，自然殺傷細胞，神經干細胞，心肌細胞等，其分化策略都是先制備出EB，然后用不同的措施定向誘導分化為目的細胞。之所以經EB途徑，目的是模擬體內胚胎發育過程，EB中內中外三胚層的細胞互相支持，互相提供分化生長的微環境。

目前制備擬胚體工藝采用6孔板、T25等小型細胞培養容器緩速震蕩培養制備。將干細胞制備為分散的單細胞后，通過緩速流動使其形成直徑80-180μm的多細胞球狀結構，生產設備通常為三維搖床或水平搖床，制備體積在5-15mL，擬胚體制備量在2000-10000個。制備過程中對流速要求較嚴格，偏大流速會導致無法形成緊密球狀結構，過小流速會導致擬胚體過大且容易粘連，不利于后期分化。由于其適合流速較緩（三維搖床5-15rpm，水平搖床40-80rpm），且擬胚體沉降速率較高，擴大容器規格會難以平衡流速緩和及充分滾動的問題，因此很難通過單一擴大培養容器的方法實行大規模制備。這對下游大規模分化工藝造成了很大制約。

發明內容

本發明目的在于提供一種擬胚體生產方式、容器以及裝置，其不改變容器容積并實現擬胚體的大量生產。

為達成上述目的，本發明提出如下技術方案，一種擬胚體生產方式，包括如下步驟：

獲取用于生產擬胚體的容器，所述容器具有一環形側面；

獲取待培養為擬胚體的細胞；

向所述容器中加入待培養的細胞與用于培養細胞的培養液；

外力驅動所述容器繞自身中心軸線轉動，以保證所述容器中的含有細胞的培養液具有相近的線速度。

在一些實施方案中，所述容器的底面為平面。

在一些實施方案中，所述容器中含有細胞的培養液轉動的線速度介于1cm/s至50cm/s。

在一些實施方案中，所述容器沿自身中心軸線轉動的轉速為1rpm-40rpm。

在一些實施方案中，所述培養液的用量占所述容器總容積的10%-30%。

在一些實施方案中，所述待培養的細胞的接種密度為0.2M/mL-3M/mL。

本申請的另一目的是提供一種容器，所述容器應用于所述的擬胚體的生產方式中，以承載含有細胞的培養液；所述容器具有環形側面，以及布設于所述容器的中軸線上的開口；所述開口采用無菌透氣濾膜蓋密封。

在一些實施方案中，所述容器在自身中軸線的兩端分別具有一開口，其中一開口配置無菌透氣濾膜蓋，另一開口配置帶有彈性橡膠口的無菌透氣濾膜蓋；所述彈性橡膠口在自然狀態下密封，在外力擠壓下具有一開口。

在一些實施方案中，所述容器的本體的材料PETG、聚苯乙烯或聚碳酸酯。

本申請的再一目的是提供一種用于生產擬胚體的裝置，適用于所述的擬胚體的生產方式，包括：容器、同軸設置的第一夾持件、第二夾持件、支架以及驅動電機；

所述容器具有環形側面，所述環形側面用于承載待培養的細胞與用于培養細胞的培養液；