[發明專利]一種殼聚糖-羧甲基纖維素固定化酶及其制備方法

在審

• 申請號: 202111293231.2
• 申請日: 2021-11-03
• 公開（公告）號: CN114317513A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 梁力曼;牛奎;田宏燕;張建平;王月輝
• 申請（專利權）人: 河北科技師范學院
• 主分類號: C12N11/12
• 分類號: C12N11/12;C12N11/10;C12N9/64
• 代理公司: 深圳樹賢專利代理事務所(普通合伙) 44705
• 代理人: 楊春女

1.一種殼聚糖-羧甲基纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：①將殼聚糖粉末溶于醋酸溶液制成濃度為1～4mg/ml殼聚糖醋酸溶液，②將羧甲基纖維素中經乙醇潤濕后，加入純化水溶解制成濃度為1～2mg/ml的羧甲基纖維素溶液，③將羧甲基纖維素溶液殼聚和糖醋酸溶液混合均勻，形成混合溶液，④將木瓜蛋白酶溶解于pH為5.5的磷酸緩沖溶液制成濃度為3.5mg/ml的木瓜蛋白酶溶液，⑤液體石蠟和石油醚按重量比1:3混合，在液體石蠟和石油醚的混合液中加入乳化劑形成油相預混液，乳化劑在油相預混液中的質量百分比為2-3%，⑥在攪拌條件下，將殼聚糖醋酸溶液和羧甲基纖維素溶液的混合溶液通過多孔膜壓入油相預混液中，重復步驟⑥1h，⑦冰浴0-5℃并繼續攪拌，得到固化的殼聚糖-羧甲基纖維素微球，將固化的殼聚糖-羧甲基纖維素微球用石油醚離心洗滌3次，用無水乙醇抽洗4-5次，真空凍干得到殼聚糖-羧甲基纖維素微球，其中，羧甲基纖維素在殼聚糖-羧甲基纖維素微球中的質量百分比為11-20%，⑧將凍干的殼聚糖-羧甲基纖維素微球加入濃度為3.5mg/ml的木瓜蛋白酶溶液中，震蕩吸附4h，⑨加入質量百分濃度為1-2.5%的戊二醛溶液交聯1h，再用濃度為1.5mg/ml的甘氨酸溶液洗去多余的戊二醛溶液，干燥后得到殼聚糖-羧甲基纖維素微球固定化木瓜蛋白酶。

2.根據權利要求1所述的殼聚糖-羧甲基纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：所述乳化劑為司盤60、司盤40或司盤20。

3.根據權利要求1所述的殼聚糖-羧甲基纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：所述步驟⑧中，殼聚糖-羧甲基纖維素微球與木瓜蛋白酶的重量比為1000：1.16-1000:2.05。

4.根據權利要求1所述的殼聚糖-羧甲基纖維素固定化酶的制備方法，其特征在于：殼聚糖醋酸溶液和羧甲基纖維素溶液的混合溶液和油相預混液的體積比為1:2000-3000。

5.一種殼聚糖-羧甲基纖維素固定化酶，其特征在于：采用如權利要求1-4任意一項所述的殼聚糖-羧甲基纖維素固定化酶的制備方法制得。