[發(fā)明專利]同時(shí)定量生物樣品中過氧化物酶和抗壞血酸的系統(tǒng)及裝置

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111291353.8
• 申請(qǐng)日: 2021-11-03
• 公開（公告）號(hào): CN114002451A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李永生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都楓昀檢測(cè)科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N35/00
• 分類號(hào): G01N35/00;G01N31/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明利用動(dòng)態(tài)過氧化物酶的連續(xù)催化動(dòng)力學(xué)曲線線性響應(yīng)區(qū)域內(nèi)一次線性回歸方程的斜率及負(fù)截距的信號(hào)實(shí)現(xiàn)了同時(shí)定量過氧化物酶活性濃度(E_POD)及抗壞血酸濃度(c_AsA)的目的，并在此基礎(chǔ)上發(fā)明了一種同時(shí)測(cè)定E_POD和c_AsA的自動(dòng)分析系統(tǒng)及裝置，已成功可用于農(nóng)業(yè)、林業(yè)、臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)中樣品的分析和研究。本發(fā)明也可檢測(cè)各類POD模擬酶進(jìn)行模擬酶的性能研究與新材料開發(fā)。本發(fā)明在計(jì)算機(jī)控制下自動(dòng)添加試劑及試樣可降低分析誤差、靈活調(diào)節(jié)樣品的測(cè)定范圍。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蔬菜、水果及生物樣品中POD和AsA含量的同時(shí)自動(dòng)測(cè)定方法及系統(tǒng)，屬于農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)中生物分析、生物學(xué)研究等領(lǐng)域。本發(fā)明還可以與多種流通式檢測(cè)器聯(lián)用，用于POD和AsA含量的同時(shí)測(cè)定。

背景技術(shù)

抗壞血酸(AsA)和過氧化物酶(POD，EC 1.11.1.7)共存于所有動(dòng)植物細(xì)胞中，并發(fā)揮重要的生理作用。AsA通過參與AsA-谷胱甘肽-NADPH循環(huán)可消除各種自由基和活性氧；AsA也是酶輔助因子和神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)酶的組成部分；人類也需要每天從食物中攝入足量的AsA來維持身體健康。

POD可清除機(jī)體內(nèi)代謝過程產(chǎn)生的H₂O₂及自由基，同時(shí)又能催化還原性底物氧化，如酚類、醛類和醇類等有害物質(zhì)使其失去毒性。植物中的POD還參與光合作用、呼吸作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞中的溶解氧濃度，氧化脂肪酸及參與含氮物質(zhì)的代謝。因此，準(zhǔn)確測(cè)定POD活性(E_POD)和抗壞血酸濃度(c_AsA)可直接得到生物機(jī)體的健康信息。

迄今，測(cè)定E_POD的方法是以分子光譜法為主。例如，流動(dòng)注射光度系統(tǒng)與POD/2，2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)/H₂O₂催化反應(yīng)體系結(jié)合，在50～200U/L范圍內(nèi)測(cè)定了微生物中的E_POD；但該方法的不足之處是，ABTS底物不但價(jià)格昂貴，而且穩(wěn)定性也差(1995，Analyst，120，2101-2105)，得到的E_POD結(jié)果嚴(yán)重偏高；另外還有一種基于吸光度/留存時(shí)間比測(cè)定E_POD的流動(dòng)注射光度法，該方法采用的是H₂O₂/POD/愈創(chuàng)木酚(GA)反應(yīng)體系，其測(cè)定范圍為0.45～7.26kU/L；該方法只能測(cè)定純的POD產(chǎn)品，或共存的AsA含量極低時(shí)的生物樣品，否則共存有高濃度的AsA時(shí)，將會(huì)嚴(yán)重干擾該方法的結(jié)果(Chinese J.Anal.Chem.，2015，43，1580-1588)。利用H₂O₂/POD/GA體系中GA的熒光減量也可以定量E_POD(ChineseJ.Anal.Chem.，2015，43，1040-1046)，測(cè)定靈敏度有所提高(0.5～60kU/L)；該方法的缺點(diǎn)是，GA不是POD催化的真正底物，基于GA濃度間接定量E_POD將嚴(yán)重影響E_POD結(jié)果的準(zhǔn)確度，而且該方法是手工操作，導(dǎo)致的測(cè)定誤差大，而且熒光儀成本要遠(yuǎn)高于光度儀。H₂O₂/POD/4-氨基安替比林(4-AP)/苯酚反應(yīng)體系也用于了E_POD定量(Microchem.J.，2017，134，98-103)，但是4-AP與ABTS存在相同的問題，而且使用的試劑種類多。