[發明專利]重組人Sema4C蛋白、表達載體、宿主細胞以及應用

有效

• 申請號: 202111284808.3
• 申請日: 2021-11-01
• 公開（公告）號: CN114045291B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 余樂;程威;盛鑫龍;劉佩佩
• 申請（專利權）人: 武漢愛博泰克生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/85;C12N15/62;C12N15/11;C12N1/21;C12N5/10;C07K14/705;A61K38/17;A61P35/00;G01N33/68;G01N33/574;C12R1/19
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 張曉博

本申請公開了重組人Sema4C蛋白、表達載體、宿主細胞以及應用。通過選取人Sema4C基因21?633aa區域中的若干結構域，構建其重組質粒，轉染真核細胞HEK 293F細胞，進行體外重組表達，獲得了相關結構域的目的蛋白。該方法具有轉染周期短和快速獲得目的蛋白的效果，能夠應用于研發階段的摸索和大規模高通量篩選蛋白。

技術領域

本申請涉及Sema4C基因技術領域，尤其涉及重組人Sema4C蛋白、表達載體、宿主細胞以及應用。

背景技術

Semaphorins家族是一種分泌型或跨膜蛋白，早期作為神經系統中一種發揮軸突導向功能的因子被發現，大部分蛋白通過其受體Plexins和Neuropilins家族發揮相應的生物學效應，包括:發育、調節細胞運動、血管生成、免疫調節、腫瘤形成和干細胞特性。一些Semaphorin家族成員參與了上皮細胞屏障的分離，與腫瘤的Epithelial-MesenchymalTransition(EMT)有關，例如，Sema3E通過激活PI3K/ERK/MAPK使Snail在細胞核內積聚來誘導EMT。例如，Sema4C在調控神經軸突的定向生長和肌管發育方面有重要作用，在人類宮頸癌、子宮內膜癌、乳腺癌和前列腺癌中均表達，并與淋巴轉移等惡性行為相關。Sema4C在乳腺癌細胞過表達上調了轉錄因子Snail、Slμg和SOX-2，在肌細胞的分化過程中Sema4C是P38MAPK信號通路的重要激活因子。研究表明Sema4C在宮頸癌組織的過表達與惡性生物學行為有關，EMT與宮頸癌的進展密切相關，Seam4C成為宮頸癌侵襲轉移的預測標記和治療靶點。

因此在體外研究或人Seam4C結構和功能尤為重要。現有技術中，對人Seam4C蛋白的重組表達一般以原核宿主為主，但原核表達容易產生包涵體和無生物活性的可溶性蛋白。因此，需要尋找新型重組表達人Seam4C蛋白的宿主或表達形式，以利用獲得體外獲得大量的人Seam4C蛋白，以利于對該蛋白進行研究，為其作為抗腫瘤藥物或診斷試劑提供幫助。

發明內容

有鑒于此，本申請的目的在于解決上述技術問題之一。

第一方面，本申請實施例公開了用于重組表達Sema4C蛋白的DNA分子，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述DNA分子具有Sema4C蛋白編碼基因的21-663aa、1-497aa、30-497aa和556-644aa結構域序列中的至少一種。

第二方面，本申請實施例公開了一種Sema4C蛋白重組表達載體，所述表達載體以質粒為骨架構建，其中插入有融合基因，所述融合基因如SEQ ID NO.1所示，所述融合基因包含Sema4C蛋白編碼基因的21-663aa、1-497aa、30-497aa和556-644aa結構域序列中的至少一種。

在本申請實施例中，所述融合基因還包含位于所述結構域5'端的第一序列和位于3'端的第二序列，所述第一序列如SEQ ID NO.2或3所示，，所述第二序列為C-6His、N-rabbit FC或C-Human FC-6His標簽。

第三方面，本申請實施例公開了用于PCR擴增Sema4C蛋白重組表達載體融合基因的引物組，其中，所述結構域包括Sema4C蛋白編碼基因的21-663aa、1-497aa、30-497aa和556-644aa結構域序列中的一種；所述引物組包括六對引物，所述六對引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4～15所示。

第四方面，本申請實施例公開了一種攜帶第二方面所述的重組表達載體的重組大腸桿菌。

第五方面，本申請實施例公開了一種用于表達Sema4C蛋白的重組表達載體的重組表達細胞，所述重組表達細胞為攜帶第二方面所述重組表達載體的HEK 293F細胞。

第六方面，本申請實施例公開了一種利用第五方面所述的重組表達細胞表達的重組蛋白。