[發明專利]一種快速生長三倍體長牡蠣“海大1號”的培育方法

有效

• 申請號: 202111275116.2
• 申請日: 2021-10-29
• 公開（公告）號: CN113749059B
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 李琪;李永國
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 青島海昊知識產權事務所有限公司 37201
• 代理人: 劉艷青

1.一種快速生長三倍體長牡蠣“海大1號”的培育方法，其特征在于，該培育方法包括以下步驟：

（1）獲得高雜合度三倍體：以二倍體長牡蠣“海大1號”為基礎群體，通過抑制二倍體長牡蠣“海大1號”受精卵第一極體排放獲得三倍體長牡蠣“海大1號”；

（2）以步驟（1）得到的三倍體長牡蠣“海大1號”雌性為母本，以二倍體長牡蠣“海大1號”雄性作為父本，利用細胞松弛素B處理受精卵，抑制其受精卵第一極體排放獲得四倍體長牡蠣“海大1號”；獲得的四倍體長牡蠣“海大1號”進行自繁之后，鏡檢后挑選四倍體長牡蠣“海大1號”自繁群體中的雄性與二倍體長牡蠣“海大1號”雌性雜交來獲得三倍體長牡蠣“海大1號”；

（3）以步驟（2）得到的四倍體長牡蠣“海大1號”雄性和二倍體長牡蠣“海大1號”雌性雜交來獲得三倍體長牡蠣“海大1號”，獲得受精卵；

（4）當步驟（3）得到的受精卵出現第一極體后，將該受精卵轉移到培育容器中進行孵化及幼蟲培育。

2.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（1）中，解剖取卵并用800目篩絹過濾，除去組織碎塊和組織液成分，然后將卵子加入24~25℃的砂濾海水中進行熟化；精卵混合后開始計時，授精5分鐘后，用0.5mg/L的細胞松弛素B處理，處理15min或開始出現第一極體時處理結束。

3.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述步驟（2）中，解剖鏡檢后挑選其中卵子數量多且呈卵形的二倍體長牡蠣“海大1號”雌性作為母本；所用三倍體母本卵子數量至少100萬粒且授精前卵子呈圓形或接近圓形；所述母本和父本均為二齡長牡蠣。

4.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（2）中，使用流式細胞儀對步驟（1）中所得二齡三倍體長牡蠣“海大1號”進行非致死的倍性檢測，解剖鏡檢后挑選卵量大，至少100萬粒、卵形較好的個體作為母本，解剖取卵并用800目篩絹過濾，除去組織碎塊和組織液成分，然后將卵子加入24~25℃的砂濾海水中進行熟化；精卵混合后開始計時，授精8~10分鐘后，用0.5mg/L的細胞松弛素B處理15分鐘，抑制受精卵第一極體排放。

5.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（3）中，每個卵子周圍5-10個精子即可保證受精率達到90%以上。

6.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（4）中，將70-80%受精卵出現第一極體時作為受精卵轉移到培育容器進行孵化的時機，此時轉移受精卵能夠保證90%以上的卵裂率。

7.如權利要求1所述的培育方法，其特征在于，上述方法還包括檢測步驟：使用流式細胞儀采用非致死的倍性檢測方法分別挑選出步驟（2）和（3）的三倍體和四倍體長牡蠣“海大1號”親貝，并檢測四倍體長牡蠣“海大1號”和二倍體長牡蠣“海大1號”雜交獲得的三倍體長牡蠣“海大1號”的三倍體率。