[發明專利]鞭腕蝦的物種鑒別方法

在審

• 申請號: 202111273640.6
• 申請日: 2021-10-29
• 公開（公告）號: CN114032312A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 朱志煌;林琪;方民杰;朱隴強
• 申請（專利權）人: 福建省水產研究所（福建水產病害防治中心）
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6869;C12Q1/686
• 代理公司: 廈門律嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 35225
• 代理人: 張輝;溫潔

本發明公開了鞭腕蝦的物種鑒別方法，1)根據目標個體的形態確定目標個體是否屬于待定的鞭腕蝦的兩種物種；若形態相同或相近，則分析它們屬于鞭腕蝦的兩種物種：A鞭腕蝦或B鞭腕蝦，2)總DNA提取與檢測，3)目的片段的PCR擴增，4)對PCR擴增產物進行電泳檢測，通過電泳圖對目的片段的長度進行比對，或者使用DNA回收試劑盒對PCR擴增產物進行回收，對回收后的目的片段基因進行測序比對，比對方法為根據以下a和/或b鑒別：a.16S基因片段長度長的為A鞭腕蝦，短的為B鞭腕蝦，b.12S基因片段長度長的為A鞭腕蝦，短的為B鞭腕蝦。本發明鞭腕蝦的物種鑒別方法采用分子實驗對鞭腕蝦進行物種鑒定，科學有效、準確可靠。

技術領域

本發明屬于物種鑒別技術領域，尤其涉及一種鞭腕蝦的物種鑒別方法。

背景技術

海洋觀賞蝦因其美麗的外觀，能有效清除某些有害生物以及可與海洋觀賞魚和其他海洋生物和諧共存而深受水族愛好者的歡迎。鞭腕蝦作為海洋觀賞蝦重要的一個類群，在水族市場中極受歡迎。有關性腺系統和人工繁育方面的研究備受科研工作者關注，但有關鞭腕蝦屬級歸類及部分種的鑒定存在很大爭議。

海洋觀賞養殖業目前還處于起步階段，大多數貿易物種仍從野外捕撈，面對市場需求量的不斷提高，無疑加劇了對珊瑚礁的破壞。針對海洋觀賞蝦在養殖生產中遇到的瓶頸，有研究已在部分海洋觀賞蝦養殖過程中取得了好的成果，但幼體成活率低仍影響這些蝦的商業化養殖。目前，有關海洋觀賞蝦的基礎研究與生產處于脫軌狀態，沒有堅實的基礎研究作為基石，很難突破海洋觀賞養殖業育苗人工化和規模化的難題。鞭腕蝦作為海洋觀賞蝦重要的一個類群，在水族貿易中極受歡迎，該類群不但外表華麗、性狀特殊、具有清潔能力，更為主要的是在人工環境下部分物種已經實現了人工育苗，然而這種育苗技術仍未達到工廠化育苗水平，解決這些制約實現工廠化人工育苗的難題，是當前迫在眉睫需要解決的問題。

近年來，有關鞭腕蝦的研究主要集中在外部形態特征、性腺發育、性轉換及交配機制等形態學和繁殖生物學方面，營養與飼料學、基因組學和進化生物學等方面的研究幾乎為零。雖然有些鞭腕蝦在人工環境下可以交配、抱卵、孵化并通過幼體變態期，然而這僅限于個別鞭腕蝦物種。此外，這種人工繁育技術培養出的鞭腕蝦物種數量較少，盡管橫紋鞭腕蝦和伍氏鞭腕蝦已實現人工育苗，但幼體較低的存活率和抱卵的不穩定性至今仍影響這些物種的商業化養殖。隨著海洋觀賞蝦產業的不斷發展，人工繁育技術也在不斷改進，餌料選擇又成為限制這些觀賞蝦物種發展的一個重要屏障。由于幼體長期得不到某些營養物質的補充，使其自身免疫力下降或不明原因而死亡。目前盡管有研究用不同餌料投喂幼體來降低死亡率，但這些研究多數來自經驗總結，并非開展實質性的基礎研究。

此外，鞭腕蝦屬里包含的種類繁多，大部分種之間在形態學上只存在很細微的差別，對于一些親緣關系比較接近或非常相似的種之間，僅靠形態學知識很難將其區分開，另外還需要鑒定人有相當豐富的鑒定經驗，因此在鞭腕蝦屬級歸類及部分種的鑒定上一直存在很大爭議。隨著分子生物學技術的不斷突破，通過分子手段開展海洋觀賞蝦實驗研究也逐漸增多，這對其人工繁育和產業化特別是在水產養殖、品種鑒定和病害防治等方面具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提出一種鞭腕蝦的物種鑒別方法，采用分子實驗的方式對鞭腕蝦進行物種鑒定，可信度高。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

本發明提供的鞭腕蝦的物種鑒別方法，利用分子實驗方法鑒別鞭腕蝦的物種的種類:

1)根據目標個體的形態確定目標個體是否屬于待定的鞭腕蝦的兩種物種；若目標個體的形態與鞭腕蝦不同，則直接鑒定為不同物種，若形態相同或相近，則分析它們屬于鞭腕蝦的兩種物種：A鞭腕蝦或B鞭腕蝦。

2)總DNA的提取與檢測，將每個目標個體用滅菌純水清洗3-4次，去殼后進行DNA的提取，提取得到鞭腕蝦總DNA；

3)目的片段的PCR擴增，通過引物對提取得到的總DNA進行16S基因片段和/或12S基因片段的PCR擴增；