[發明專利]SARS-CoV-2病毒樣顆粒的制備方法及其應用在審
| 申請號： | 202111271508.1 | 申請日： | 2021-10-29 |
| 公開（公告）號： | CN114395017A | 公開（公告）日： | 2022-04-26 |
| 發明（設計）人： | 戴俊彪;馬英新;毛國斌 | 申請（專利權）人： | 中國科學院深圳先進技術研究院 |
| 主分類號： | C07K14/165 | 分類號： | C07K14/165;C12N15/50;C12N15/85;A61K39/215;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京華睿卓成知識產權代理事務所(普通合伙) 11436 | 代理人： | 唐莉 |
| 地址： | 518055 廣東省深圳市*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | sars cov 病毒 顆粒 制備 方法 及其 應用 | ||
1.用于制備SARS-CoV-2病毒樣顆粒的組合物，包括下述(a)，還包括選自下述(b)和(c)中的任一種或任兩種：
(a)包含StruΔS片段的第一質粒，所述ΔS片段包含編碼SARS-CoV-2病毒的至少一種結構蛋白或其突變體和/或至少一種輔助蛋白或其突變體的核酸序列，且所述ΔS片段不包含編碼SARS-CoV-2病毒的S蛋白或其突變體的核酸序列；
(b)包含S片段的第二質粒，所述S片段包含編碼SARS-CoV-2病毒的S蛋白或其突變體的核酸序列；
(c)包含SARS-CoV-2病毒的包裝信號片段的第三質粒，所述包裝信號片段包含SARS-CoV-2病毒的包裝信號序列。
2.根據權利要求1所述的組合物，其中所述的S蛋白的突變體相對于SARS-CoV-2病毒的S蛋白的突變包括N331Q、N501Y、D614G和/或P681H。
3.根據權利要求1或2所述的組合物，其中所述StruΔS片段包含下述任一種：
(1)編碼SARS-CoV-2病毒的除S蛋白之外的全部結構蛋白和全部輔助蛋白的核酸序列；
(2)與(1)相比，所述結構蛋白和輔助蛋白中的至少一種相對于野生型SARS-CoV-2病毒具有突變；和
(3)與(1)相比，缺失所述結構蛋白和輔助蛋白中的任一種。
4.根據權利要求1-3任一項所述的組合物，其中所述包裝信號序列是NCBI序列號NC_045512.2的第19900-20000位核苷酸或NCBI序列號NC_045512.2的第19773-20335位核苷酸。
5.根據權利要求1-4任一項所述的組合物，其中所述包裝信號片段包含SARS-CoV-2病毒基因組的ORF1ab。
6.權利要求1-5任一項所述的組合物的制備方法，包括分別通過下述方法制備第一質粒、第二質粒和/或第三質粒：
(1)將StruΔS片段、S片段和/或ORF1ab包裝信號片段分別拆分為在相鄰片段之間具有同源序列的DNA短片段；
(2)將由步驟(1)獲得的DNA短片段和線性化質粒載體轉入酵母細胞中，進行同源重組，分別獲得第一質粒、第二質粒和/或第三質粒。
7.SARS-CoV-2病毒樣顆粒的制備方法，包括：
用權利要求1-5任一項的組合物轉染包裝細胞，獲得SARS-CoV-2病毒樣顆粒。
8.根據權利要求7所述的制備方法，還包括
分別通過下述方法制備第一質粒、第二質粒和/或第三質粒：
(1)將StruΔS片段、S片段和/或包裝信號片段分別拆分為在相鄰片段之間具有同源序列的DNA短片段；
(2)將由步驟(1)獲得的DNA短片段和線性化質粒載體轉入酵母細胞中，進行同源重組，分別獲得第一質粒、第二質粒和/或第三質粒。
9.根據權利要求8所述的制備方法，進一步包括將第一質粒、第二質粒和/或第三質粒分別在大腸桿菌中進行擴增，然后轉染包裝細胞。
10.由權利要求7-9任一項所述的制備方法制備獲得的SARS-CoV-2病毒樣顆粒。
11.根據權利要求1-5任一項的組合物或根據權利要求10所述的SARS-CoV-2病毒樣顆粒在制備用于預防或治療SARS-CoV-2病毒感染的疫苗中的用途。
12.根據權利要求1-5任一項的組合物或根據權利要求10所述的SARS-CoV-2病毒樣顆粒在體外用于SARS-CoV-2病毒感染細胞的研究中的用途。
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