[發明專利]一種C-kit和PDGFR突變檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202111263855.X
• 申請日: 2021-10-27
• 公開（公告）號: CN114058701A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 劉小芳;李丙亮;翟建新
• 申請（專利權）人: 上海科亦生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6844
• 代理公司: 上海諾衣知識產權代理事務所(普通合伙) 31298
• 代理人: 衣然

本發明屬于基因突變檢測技術領域，具體公開了一種C?kit和PDGFR突變檢測試劑盒，包括PCR反應液、PCR反應條A、PCR反應條B和石蠟油；所述PCR反應液放置于1.5ml可立螺帽離心管內，PCR反應液組分包括Taq酶、dNTPs、Mg2+和Buffer；所述PCR反應條A和PCR反應條B放置于PCR八聯管內，PCR反應條A和PCR反應條B包括引物、探針和石蠟；所述石蠟油同樣放置于1.5ml可立螺帽離心管內；本試劑盒可定性檢測樣本中c?kit和PDGFRα基因可能存在的絕大多數突變類型，檢測通量高，理論上只要PNA Blocker結合的序列中存在突變，即可檢出；靈敏度可達到5％；操作簡單，檢測時間短，檢測成本低。既解決了常規ARMS?PCR方法通量低的問題，又具有較高檢測靈敏度，檢測成本、檢測周期也遠低于二代測序。

技術領域

本發明涉及基因突變檢測技術領域，具體為一種C-kit和PDGFR突變檢測試劑盒。

背景技術

c-kit基因位于人染色體4q12-13，屬于原癌基因，其產物是受體酪氨酸激酶Ⅲ型，C-KIT是酪氨酸激酶受體蛋白家族的重要成員之一，其作為干細胞因子的受體，可以通過一系列信號通路參與造血干細胞增殖分化的調控。近年來研究發現，c-kit基因存在突變，特別是激活性突變與急性白血病中的發病、治療和預后等密切相關。

胃腸道間質瘤(GIST)是消化道最常見的間葉源性腫瘤。絕大部分的GIST 均表達c-kit基因編碼的Kit蛋白(CD117)。在分子層面上，大部分的GIST 均存在c-kit基因突變，從而導致Kit蛋白的活化不需要配體SCF參與就能刺激腫瘤細胞的持續增殖和抗凋亡信號的失控。

GIST中c-kit基因突變率約為90％，且突變形式多樣。其中位于11號外顯子Lys550-Val560區段的變異最為常見(約占70-80％)，位于9號外顯子 Ala502-Tyr503區段的6堿基重復突變約占5-10％。臨床研究表明GIST中c-kit 基因的突變情況與格列衛分子靶向治療的療效相關：存在11號外顯子突變患者的療效最好，存在9號外顯子突變的患者療效次之，而野生型GIST的療效最差。另外，對于9號外顯子突變的患者，提高用藥劑量可顯著提高療效。檢測c-kit基因突變對于指導GIST患者的合理用藥，具有重要的參考價值。

PDGFRα為原癌基因，編碼血小板源生長因子受體α，在器官發育、傷口愈合及腫瘤發展等方面起重要作用；其在胃腸道間質瘤(GIST)中有較大表達概率，常作為GIST診斷的指標物質；在突變的類型中，GIST中最常見的單發PDGFRA的突變是點突變D842V(62.6％)，導致第842位天門冬氨酸為纈氨酸所取代；最常見的移碼突變是缺失突變DIMH842-845和IMHD843-846，而這兩種突變在蛋白表達上相同，占所有PDGFRA突變的14.9％。

腫瘤基因突變的常見檢測方法包括ARMS-PCR法、Sanger測序法、二代測序法、數字PCR法等。AMRS-PCR法和數字PCR只能針對已知突變進行檢測，檢測通量非常有限。Sanger測序法是突變檢測的金標準，但靈敏度只能達到 5％～20％。二代測序技術在檢測通量和靈敏度方面均具有較大的優勢，但檢測方法繁瑣，需要昂貴的儀器設備，且檢測周期也較長。

發明內容

本發明的目的在于提供一種C-kit和PDGFR突變檢測試劑盒，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種C-kit和PDGFR突變檢測試劑盒，包括PCR反應液、PCR反應條A、PCR反應條B和石蠟油；所述 PCR反應液放置于1.5ml可立螺帽離心管內，PCR反應液組分包括Taq酶、 dNTPs、Mg2+和Buffer；所述PCR反應條A和PCR反應條B放置于PCR八聯管內，PCR反應條A和PCR反應條B包括引物、探針和石蠟；所述石蠟油同樣放置于1.5ml可立螺帽離心管內。

本發明該提供了一種C-kit和PDGFR突變檢測試劑盒的檢測方法，包括以下步驟：