[發明專利]一種同時檢測復可托原料及其產品中六種豬常見病毒的試劑盒

有效

• 申請號: 202111262950.8
• 申請日: 2021-10-28
• 公開（公告）號: CN114317816B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發明（設計）人: 洪亮;潘映秋;王福云
• 申請（專利權）人: 臺州市藥品檢驗研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6806;C12Q1/686;C12Q1/6837;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

1.一種同時檢測復可托原料及其產品中六種豬常見病毒的試劑盒，包括基因膜芯片、雜交試劑和RT-PCR反應試劑；

(1)所述基因膜芯片包括尼龍膜基片和在尼龍膜基片上陣列式分布的寡核苷酸探針、對照探針及空白的點涂層；具體為六條病毒組特異性檢測探針、一條內參探針、一條陽性對照探針和空白點樣液陰性對照，其中，

①所述六條病毒組特異性檢測探針的基因序列為：

PRRSV探針：NH₂-C6?GGATGTACTTGCGGCCTAGCAAGCA

CSFV探針：NH₂-C6?GGTACGACCTGATAGGGTGCTGCAGAGGCCCAC

ASFV探針：NH₂-C6?TTCTCTTGCTCTGGATACGTTAATATGA

JEV探針：NH₂-C6?CATTCTCRTCCCARGGTCCCTGGTTTTGTGTCC

FMDV探針：NH₂-C6?GGCGAGTCCTGCCACRGAGATCAACTTC

PRV探針：NH₂-C6?GTCACCTTGTGGTTGTTGCGCACGTACTCG

②所述一條內參探針的基因序列為：

內參探針：NH₂-C6?AGGGTTCGTTTGTTCAACGATTAATAGT

③所述一條陽性對照探針的基因序列為：

PC探針：NH₂-C6?CGGGTTAATGCGCGATTGTCACCACACGTTGCG

(2)所述RT-PCR反應試劑包括七重引物對組合，各對引物的序列從5’-3’如下：

內參：正向引物：ACGACCTCGATGTTGGATCAG

反向引物：biotin-GGTCTGAACTCAGATCACGTAGG

PRRRSV：正向引物：biotin-AATTCATCACTTCCAGATGCCG

反向引物：TGCCACCCAACACGAGGC

CSFV：正向引物：GTAGTTCGACGTGAGCAGGAG

反向引物：biotin-CAGCAGAGATTTTTATACTAGCCTGTTAG

ASFV：正向引物：biotin-GAATACCAACCCAGCGGTCA

反向引物：CAAGATCGGCCGTGGTGATA

JEV：正向引物：biotin-AAGCACAATCGGAGGGAAGG

反向引物：GCCTCTCTTGCCACAATCCT

FMDV：正向引物：biotin-CCGTGGGACCATACAGGAGA

反向引物：CGTTCACCCATCGCAGGTAA

PRV：正向引物：biotin-GGCAAGTGCGTCTCCAAG

反向引物：GGCGAAGGAGTCGTAGGG。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述基因膜芯片的制備方法為：將尼龍膜基片裁切至A4紙大小，用打印機打印出適合雜交卡盒大小的芯片格子，室溫下放置12h以上待油墨完全晾干；室溫下將膜浸泡在含10％二環己基碳二亞胺(DCCD)的亞甲氯溶液中30min，用亞甲氯溶液洗膜4次，每次5min，最后將膜放置于室溫下懸掛晾干，備用；

將病毒組特異性檢測探針用探針點樣液稀釋至濃度15μM，按照點陣上規定的順序依次點制在尼龍膜芯片上，點制好探針的膜芯片放在紫外燈正下方照射10min，常溫干燥保存，備用。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述雜交試劑包括雜交液、雜交清洗液、酶標液、酶標清洗液1、酶標清洗液2、顯色液、顯色清洗液以及堿性磷酸酶標記鏈霉親和素。