[發明專利]褪黑激素在延緩牛卵泡顆粒細胞體外分化中的應用

在審

• 申請號: 202111259618.6
• 申請日: 2021-10-28
• 公開（公告）號: CN114058567A
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 許曉玲;楊婷;劉彥;白佳樺;馮濤;秦玉圣;宋玉清;肖霖力
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京智為時代知識產權代理事務所(普通合伙) 11498
• 代理人: 王加嶺;楊靜

本發明提供了褪黑激素的一種新的用途，具體為褪黑激素在延緩牛卵泡顆粒細胞體外分化中的應用。本發明通過采用添加有褪黑激素的體外培養液對牛卵泡顆粒細胞培養時，褪黑激素能夠抑制牛卵泡顆粒細胞孕酮的合成。褪黑激素作為牛卵巢功能的內分泌調控因子，通過下調類固醇激素的合成抑制促腎上腺皮質激素(ACTH)，進而延緩顆粒細胞分化。褪黑激素能夠成為抑制牛卵泡顆粒細胞類固醇合成的制劑藥物在畜牧業生產上推廣應用，具有良好的市場效應和社會效應。

技術領域

本發明屬于家畜配子胚胎工程技術領域，具體涉及褪黑激素在延緩牛卵泡顆粒細胞體外分化中的應用。

背景技術

卵泡顆粒細胞是卵泡中最重要的體細胞，對卵泡局部微環境調節有重要作用。早期顆粒細胞是由卵泡上皮細胞分化而來。顆粒細胞作為重要的類固醇激素合成細胞，可以促進卵巢合成與分泌雌激素和孕激素等多種激素及生長因子，通過縫隙連接調控卵泡膜細胞和卵母細胞的生長、分化和成熟，進而調控卵泡發育、成熟、排卵以及卵泡閉鎖等過程。

褪黑激素，N-乙酰基-5甲氧基色胺(Melatonine，MT)，在脊椎動物中主要由松果體合成和分泌，受光照調節明顯。褪黑激素具有清除自由基和防止氧化損傷，促進抗氧化酶的表達，增強線粒體功能，緩解卵泡內的氧化應激等作用。研究表明，褪黑激素與生殖系統聯系緊密，主要通過結合下丘腦-垂體-性腺軸系上的結合位點、活化其受體進而調控繁殖功能。褪黑激素通過控制GnRH、LH產生和分泌、睪酮的合成從而啟動動物性腺發育和繁殖活動。褪黑激素能夠促進許多物種的卵母細胞成熟，如綿羊、豬、牛、小鼠和人等。另外，褪黑激素表現出極強的抗氧化和抗凋亡能力，能夠降低囊胚凋亡，提高胚胎質量和胚胎著床率，促進受精及體外受精后的早期胚胎發育。

褪黑激素對卵巢顆粒細胞具有調節作用。褪黑激素刺激體外培養大鼠顆粒細胞孕酮的合成(Fiske等，1984)，也有研究證明褪黑激素對孕酮分泌無影響(Nakamura等，2014)。也有研究結果表明褪黑激素促進體外培養的牛和人顆粒細胞孕酮的合成和分泌(Webley等，1986)。近期研究證實褪黑激素促進體外培養羊顆粒細胞孕酮的分泌(Baratta等，1992)。褪黑激素對豬顆粒細胞的影響不同于牛和羊，Sirotki(1994)證實其刺激雌激素的合成，抑制孕酮的合成。綜上，褪黑激素對顆粒細胞的影響因物種，處理濃度和時間，培養液成分的不同而造成結果有所差異。目前，褪黑激素對牛顆粒細胞的發育和功能調節作用的研究比較少見，有待深入研究。

卵巢囊腫是引起奶牛不孕癥最常見的原因之一，其嚴重影響著奶牛的繁殖效率，制約著奶牛場的發展和養殖業的經濟效益。外源促腎上腺皮質激素(ACTH)可誘導奶牛發生卵泡囊腫，其主要通過激活下丘腦-垂體-腎上腺軸，改變LH分泌的脈沖頻率，使排卵前LH峰無法出現而不能排卵，繼而形成卵巢囊腫，其機理與應激導致卵巢囊腫一致(Amweg等，2013；Biran等，2015；Velazquez等，2013)。基于此，體外培養牛卵泡顆粒細胞，加ACTH后對顆粒細胞類固醇激素分泌水平產生了影響。但是，ACTH對顆粒細胞類固醇激素的分泌影響是否可以得到恢復，褪黑素對顆粒細胞類固醇激素分泌功能的恢復的作用尚不確定，目前無此方面的研究報道。

發明內容

本發明目的在于提供褪黑激素一種新的用途，具體是褪黑激素在延緩牛卵泡顆粒細胞體外分化中的應用。

為實現上述目的，本發明采用以下的技術方案為：

褪黑激素在延緩牛卵泡顆粒細胞體外分化中的應用。

如上所述的應用，其包括先用促腎上腺皮質激素對孕酮合成的刺激，后再添加褪黑激素進行延緩牛卵泡顆粒細胞體外分化。

如上所述的應用，優選地，所述褪黑激素在牛卵泡顆粒細胞體外的培養液中濃度為10^-9mol/L～10^-5mol/L。

進一步，優選地，所述褪黑激素在牛卵泡顆粒細胞體外的培養液中濃度為10^-7mol/L。