[發明專利]抗MUM1蛋白單克隆抗體、細胞系及其應用

有效

• 申請號: 202111254046.2
• 申請日: 2021-10-27
• 公開（公告）號: CN113943369B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 吳茂;李玲玲;黃信超;高慧然;李恢波
• 申請（專利權）人: 福州邁新生物技術開發有限公司
• 主分類號: C07K16/32
• 分類號: C07K16/32;C12N15/13;C12N5/20;G01N33/577;C12N15/12;C12R1/91
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓

本發明涉及生物檢測領域，提供了一種抗MUM1蛋白單克隆抗體,其重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸序列。發明人還提供了一株分泌抗MUM1蛋白的雜交瘤細胞系，所述細胞系為小鼠雜交瘤細胞系5G5C11H10，保藏號為：CGMCC?NO.22313。抗MUM1蛋白單克隆抗體,具有高特異性、敏感性，可以特異性識別表達MUM1蛋白的細胞，適用于免疫學檢測，特別是免疫組化檢測。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及抗MUM1蛋白單克隆抗體、細胞系及其應用。

背景技術

MUM1基因即多發性骨髓瘤相關癌基因，別名PIP，LSIRF，ICSAT和NFEMS。是一個分子量為50kDa蛋白。表達產物為一種轉錄因子，是干擾素家族的成員之一，在基因調控中起重要作用。其異常表達是由于染色體易位：t(6；14)(p25；q32)，即MUMl易位到14號染色體IgH增強子的位點，導致MUMl蛋白過表達，促進了腫瘤的形成。

MUM1表達于正常的漿細胞、晚期B細胞和活化的T細胞，并且在一些B細胞和T細胞淋巴瘤中也有表達，是B細胞向漿細胞分化的重要調控因子，傳統認為MUM1是生發中心后期分化階段B細胞標記物。并認為MUM1的表達可能是檢測惡性B細胞增生的一個有用的指標。MUM1在T淋巴細胞中的表達主要位于細胞核，在正常淋巴組織中主要表達于漿細胞、5％～10％的生發中心B細胞以及激活的T細胞,并且不伴有BCL_6的表達。MUM1在淋巴造血系統中過表達可促進腫瘤形成,研究表明B細胞淋巴瘤中MUM1的表達提示該細胞處于分化的終末階段且MUM1在起源于前驅T細胞的T_LBL/L組中的表達明顯低于ALCL組及PTL組,因此可推測MUM1在T淋巴細胞的活化上起到了重要作用。彌漫大B細胞淋巴瘤(Diffuse?Large?B—cell?Lymphoma，DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中最常見的一種亞型，約占每年新診斷非霍奇金淋巴瘤總數30—40％，其惡性程度較高，在病理形態及臨床特征上均具有明顯的異質性。DLBC因其具有高度異質性且沒有明確的組織學標準進行細分，患者的預后難以預測。Hans等應用DNA微陣列技術根據CD10、Bcl－6及MUM1將DLBCL分為(germinal?center?B－cell－like，GCB)型和non－GCB型，GCB型的預后明顯好于non－GCB型，但因價格昂貴在臨床難以推廣。尋找簡單、經濟的預測方法成為必然。隨著抗原技術的進步、抗體的廣泛應用、自動免疫組化儀的普及，免疫組化技術成為檢測腫瘤細胞起源最價廉物美的方法。目前DLBCL中，運用較多的是CD10、Bcl－6及MUM1的聯合檢測。

發明內容

發明人提供了一種抗MUM1蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列分別是SEQ?ID?NO.2和SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸序列。

進一步地，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區氨基酸序列分別是SEQ?IDNO.4和SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列所編碼。

進一步地，所述單克隆抗體制備過程中，免疫小鼠所用的抗原為SEQ?IDNO.1所示核苷酸序列編碼，經由大腸桿菌重組表達的重組蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體特異性識別人MUM1蛋白。

進一步地，所述單克隆抗體由保藏號為CGMCC?NO.22313的雜交瘤細胞系產生。所述細胞株為小鼠雜交瘤細胞系5G5C11H10，分類命名為：小鼠雜交瘤細胞系，該細胞系已于2021年04月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。

進一步地，所述抗MUM1蛋白為小鼠IgG1亞型單克隆抗體。

發明人還提供了一種抗MUM1蛋白單克隆抗體的制備方法，其免疫小鼠所用的抗原為SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列編碼，經由大腸桿菌重組表達的重組蛋白。