[發明專利]一種生產雞馬立克氏病毒株的方法及其應用

在審

• 申請號: 202111248458.5
• 申請日: 2021-10-26
• 公開（公告）號: CN113846067A
• 公開（公告）日: 2021-12-28
• 發明（設計）人: 祁小莉;方麗華;錢旭東;張萍;唐堂;施慶才;酈曉瓊;葉東紅;仇婧
• 申請（專利權）人: 乾元浩生物股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02;C12N5/077;C12N5/02;A61K39/255;A61P31/22
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 朱芳

本發明涉及獸用生物制品領域，尤其涉及一種生產雞馬立克氏病毒株的方法及其應用。所述方法包括：將雞胚成纖維細胞在36.5～39℃的條件下培養22～24小時；后接種工作毒株，繼續在36.5～39℃的條件下培養至70％的細胞發生病變；所述雞胚成纖維細胞的細胞生長采用F10?199營養液，且密度為120～180萬/ml。本發明通過特定的方法生產雞馬立克氏病病毒CVI988?Rispens株批間差異小、收獲病毒蝕斑數高，與國外同類疫苗相比具有相同的預防效果，實現培養面積大，節省空間，在有限的空間內實現提高產能的目的，同時保證純凈性、安全性、免疫原性良好，降低人為污染、質量不可控等風險。

技術領域

本發明涉及獸用生物制品領域，尤其涉及一種生產雞馬立克氏病毒株的方法及其應用。

背景技術

雞馬立克病是由皰疹病毒科的馬立克氏病病毒(Marek’s disease virus，MDV)引起的雞的一種高度傳染腫瘤性疾病，以淋巴組織增生和腫瘤形成為特征，在外周神經、性腺、虹膜各種臟器、肌肉和皮膚發生單核細胞浸潤。會感染損害雞的免疫器官，造成免疫抑制，導致機體對疫苗的免疫應答和抵抗力下降，引起其他多種疾病的并發和繼發感染，造成巨大的經濟損失。

預防此病的有效方法是疫苗免疫，HVT凍干苗不能有效控制此病，而I型液氮苗的效果較HVT好，應用范圍廣。CVI988-Rispens制苗毒株為荷蘭引進毒株，傳統的生產工藝通常采用轉瓶貼壁培養的方式，具有結構簡單、投資少、技術成熟等優點，但同時也存在著污染風險高、可控性差、勞動強度大、占用空間大、能耗高、水耗量大等缺點。而用細胞工廠制備生產馬立克氏病I型液氮苗的方法，具有易于規模化生產、能較好地維持病毒抗原穩定性、產能高、批間差異小等優點，生產的疫苗能夠有效地控制預防馬立克氏病。

發明內容

為了解決現有技術存在的問題，本發明的目的是提供一種生產雞馬立克氏病疫苗株的方法及其應用。

第一方面，本發明一種生產雞馬立克氏病毒株的方法，包括：將雞胚成纖維細胞在36.5～39℃的條件下培養22～24小時；后接種工作毒株，繼續在36.5～39℃的條件下培養至70％的細胞發生病變；

所述雞胚成纖維細胞的細胞生長采用F10-199營養液，且密度為120～180萬/ml。

進一步地，所述F10-199溶液包括：

HAM’S/F-10和199培養基。

進一步地，所述方法包括：

將雞胚制成細胞懸液形式的雞胚成纖維細胞；

將所述雞胚成纖維細胞在36.5～39℃的條件下培養22～24小時；后接種工作毒株，繼續在36.5～39℃的條件下培養至70％的細胞發生病變；

收集所有細胞，于2～8℃，2000～3000r/min離心10～20分鐘，收集沉淀。

進一步地，所述工作毒株為血清I型的馬立克氏病病毒CVI988-Rispens株。

進一步地，所述培養為在細胞工廠中進行培養，所述工作毒株的接種量為 1500～2000PFU/cm²；和/或，所述雞胚成纖維細胞的密度為140～160萬/mL。

第二方面，本發明提供一種馬立克氏病疫苗，所述馬立克氏病疫苗包括由所述方法制備得到的馬立克氏病毒株。

進一步地，所述馬立克氏病疫苗包括：權利要求1-5任一項所述方法制備得到的馬立克氏病毒株、199營養液、新生牛血清和冷凍保護劑；

其中，199營養液、新生牛血清和冷凍保護劑的體積比為(70～90):(5～20):(5～20)。