[發(fā)明專利]對蝦METTL3基因的dsRNA及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111246186.5
• 申請日: 2021-10-26
• 公開（公告）號(hào): CN113862270B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王偉;雷易果
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東海洋大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;C12N15/89;A01K67/033
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 林德強(qiáng)

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了對蝦METTL3基因的dsRNA及其應(yīng)用。本發(fā)明首次公開了甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3在調(diào)控對蝦蛻皮中的應(yīng)用，以及甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3抑制劑在促進(jìn)對蝦蛻皮中的應(yīng)用；還提供一種由SEQ?ID.NO.5所示的核苷酸序列和其反向互補(bǔ)序列所示的核苷酸序列組成的雙鏈RNA，將該雙鏈RNA注入對蝦體內(nèi)，可以顯著提高對蝦的蛻皮率，加速蛻皮過程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及對蝦METTL3基因的dsRNA及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

包括對蝦在內(nèi)的甲殼動(dòng)物在其整個(gè)生命周期中要經(jīng)歷多次蛻皮過程，而對蝦正常的生長、發(fā)育以及繁殖都以蛻皮過程的順利完成為前提條件，蛻皮相關(guān)的分子調(diào)控機(jī)理也是國內(nèi)外關(guān)注的熱點(diǎn)問題。根據(jù)生長發(fā)育階段的不同，對蝦的蛻皮行為主要分為三種：發(fā)生在幼體至仔蝦階段的發(fā)育變態(tài)蛻皮；發(fā)生在仔蝦至成蝦階段的生長蛻皮；以及雌性個(gè)體在交配前發(fā)生的生殖蛻皮。無論哪種蛻皮過程，對蝦體內(nèi)都會(huì)發(fā)生一系列復(fù)雜的生理變化，涉及多個(gè)基因通路的動(dòng)態(tài)調(diào)控，與許多生物學(xué)過程密切相關(guān)，包括細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、蛻皮激素的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。凡納濱對蝦(學(xué)名Litopenaeus?vannamei)又稱南美白對蝦，俗稱白腳蝦，白蝦，分類上隸屬于節(jié)肢動(dòng)物門、甲殼綱、十足目、對蝦科、對蝦屬，是一種暖水性甲殼動(dòng)物，也是全世界最重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖蝦類之一。

研究表明，生物體內(nèi)的信使RNA(mRNA)上存在著上百種化學(xué)修飾，在真核生物中N6-腺嘌呤(m6A)甲基化修飾是最為常見的一種mRNA轉(zhuǎn)錄后化學(xué)修飾。在20世紀(jì)中期，RNA的m6A甲基化現(xiàn)象首次被發(fā)現(xiàn)，指的是腺嘌呤核苷酸在N-6位置上發(fā)生甲基化。在動(dòng)物和植物體內(nèi)，參與調(diào)控m6A甲基化的蛋白主要分為三大類：m6A甲基轉(zhuǎn)移酶、m6A去甲基酶以及m6A結(jié)合蛋白，分別發(fā)揮甲基化修飾、去甲基化和甲基化位點(diǎn)識(shí)別的作用。甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3(METTL3)是RNA甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體中最為核心的組成成分，它包含一個(gè)S-腺苷甲硫氨酸(SAM)結(jié)合區(qū)域，該區(qū)域能夠識(shí)別RNA中的m6A修飾位點(diǎn)，并且將SAM結(jié)合區(qū)域的甲基轉(zhuǎn)移到該位點(diǎn)上，從而實(shí)現(xiàn)甲基的轉(zhuǎn)移。近年來關(guān)于METTL3基因的研究發(fā)現(xiàn)，METTL3在動(dòng)物的生長發(fā)育過程中扮演著重要角色。在植物、酵母和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，METTL3的基因沉默會(huì)導(dǎo)致mRNA中m6A的完全或接近完全缺失。在小鼠(Mus?musculus)中，METTL3基因的缺失使其胚胎干細(xì)胞喪失分化能力，且胚胎在早期發(fā)育過程中死亡。果蠅(Drosophila?melanogaster)缺失METTL3基因后，神經(jīng)發(fā)育紊亂，飛行能力以及性別分化都受到影響。而對蝦RNA甲基化相關(guān)研究較少，對蝦m6A甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3基因的序列和表達(dá)特征也未見相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明第一方面的目的，在于提供甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3(METTL3)在調(diào)控對蝦蛻皮中的應(yīng)用。

本發(fā)明第二方面的目的，在于提供甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3(METTL3)抑制劑的應(yīng)用。

本發(fā)明第三方面的目的，在于提供一種dsRNA。

本發(fā)明第四方面的目的，在于提供編碼本發(fā)明第三方面的dsRNA的核酸分子。

本發(fā)明第五方面的目的，在于提供包含本發(fā)明第四方面的核酸分子的表達(dá)盒、載體或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系。

本發(fā)明第六方面的目的，在于提供本發(fā)明第三方面的dsRNA、本發(fā)明第四方面的核酸分子、本發(fā)明第五方面的表達(dá)盒、載體或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系的應(yīng)用。

本發(fā)明第七方面的目的，在于提供一種產(chǎn)品。

本發(fā)明第八方面的目的，在于提供一種促進(jìn)對蝦蛻皮的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3(METTL3)在調(diào)控對蝦蛻皮中的應(yīng)用。

優(yōu)選地，所述甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3包括甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3蛋白和甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白3基因。