[發(fā)明專利]一種芽孢桿菌HSY32、殺蟲蛋白、cry-like殺蟲基因及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111246045.3
• 申請日: 2021-10-26
• 公開（公告）號: CN113789285B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐志霞;魏力;王洋洋;金映虹;吳紅萍;李欣欣;王銳萍;張文飛
• 申請（專利權(quán)）人: 海南師范大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C07K14/32;C12N15/32;A01N47/44;A01P5/00;A01P7/04;C12R1/07
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 于躍

本發(fā)明涉及一種芽孢桿菌HSY32、殺蟲蛋白、cry?like殺蟲基因及應用，生物活性測定表明殺蟲蛋白、cry?like殺蟲基因?qū)π沱愲[桿線蟲和南方根結(jié)線蟲具有很高的毒性，可用于農(nóng)業(yè)害蟲的防治。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種芽孢桿菌HSY32、殺蟲蛋白、 cry-like殺蟲基因及應用。

背景技術(shù)

線蟲對農(nóng)作物的危害極大，可寄生在植物體各個部位，吸取寄主養(yǎng)分用于自身生長繁殖，不僅直接對寄主造成傷害，而且可導致外界病原如病毒、真菌、細菌的入侵，加重寄主植物的病害。寄生線蟲種類達4,100多種，破壞程度最為嚴重的是根結(jié)線蟲和囊腫線蟲，嚴重影響全球糧食作物產(chǎn)量與品質(zhì)。國際上公認的共有十大類毀滅性線蟲，據(jù)美國一項研究機構(gòu)調(diào)查顯示，由于寄生線蟲的危害，全球農(nóng)林作物導致的損失高達800多億美元。

線蟲多是在植物的地下部分活動，破壞植物組織，已經(jīng)造成了巨大的經(jīng)濟損失，其防治難度高于其他昆蟲類的防治。植物寄生線蟲的防治主要包括物理防治、化學防治和生物防治。物理防治主要包括旱季深翻土壤暴曬、對染病地塊停耕消毒、作物播種前期拌藥處理、利用大水漫灌土地等均起到一定的成效。然而，面對耕地減少、土地荒漠化、人口數(shù)量激增等現(xiàn)實問題，物理防治的操作空間有限，效果不明顯，易反復發(fā)作，防治極其不徹底。化學防治主要是利用藥劑，通過線蟲表皮吸收或是直接進入腸道使線蟲中毒死亡，如二溴氯丙烷、DTT等，土壤施藥后對大多數(shù)地下害蟲都有毒殺作用，但是對于有益的昆蟲，比如蚯蚓同樣致死。有些藥品是麻痹線蟲致死，比如克線磷、氯唑磷等，作物播種前期進行拌種處理或者穴施作物根際周圍使用。化學殺蟲劑的殺蟲效力高，具有見效快，用藥成本較低等特點，但是，農(nóng)藥的高毒和高殘留影響了人們的身體健康，也極易導致無辜的動物中毒或死亡，污染水源河道，農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)也得不到保障。隨著人們綠色科學環(huán)保意識的提高，農(nóng)田里化學農(nóng)藥的使用量正逐年遞減，具有危害性農(nóng)藥將逐步退出田間舞臺。

生物防治主要是利用線蟲的一些自然天敵，比如殺線蟲微生物和殺線蟲植物，以及某些微生物或者植物所產(chǎn)生的殺線蟲代謝物。1985年Bone等人首次證實 Bt的Cry蛋白對線蟲有活性以來，從有關(guān)Bt對防治寄生線蟲的研究引起了人們極大的關(guān)注。到目前為止，已經(jīng)報道具有殺線蟲活性的Bt晶體蛋主要有Cry1、 Cry5、Cry6、Cry12、Cry13、Cry14、Cry21與Cry55共8大類。2003年Wei 等發(fā)現(xiàn)殺線蟲晶體蛋白Cry5B、Cry6A、Cry21A和Cry14A對多種線蟲都表現(xiàn)有活性，而表現(xiàn)最為優(yōu)異的是Cry5B晶體蛋白。其中對秀麗隱桿線蟲有活性的蛋白，對其它五種寄生線蟲大多同樣也有活性。但是，目前鮮有菌株和基因?qū)嶋H用于大田防治作物線蟲，非常有必要挖掘更多可用于線蟲生物防治的微生物資源和基因資源。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種芽孢桿菌HSY32，其特征在于，所述芽孢桿菌HSY32屬于蕈狀芽孢桿菌Bacillus mycoides，保藏單位：中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為 CCTCC NO：M2021869。保藏日期為2021年7月12日。分類命名：蕈狀芽孢桿菌 Bacillus mycoides。保藏地址：中國武漢武漢大學

本發(fā)明的另一實施方案提供一種殺蟲蛋白(Cry-like蛋白)，其特征在于所述殺蟲蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發(fā)明的另一實施方案提供一種cry-like殺蟲基因，其特征在于所述cry-like殺蟲基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發(fā)明的另一實施方案提供上述芽孢桿菌HSY32在制備上述殺蟲蛋白、 cry-like殺蟲基因中的應用。

本發(fā)明的另一實施方案提供上述殺蟲蛋白和/或cry-like殺蟲基因在制備防治農(nóng)業(yè)害蟲藥物中的應用。所述農(nóng)業(yè)害蟲優(yōu)選線蟲目昆蟲，進一步優(yōu)選秀麗隱桿線蟲、南方根結(jié)線蟲。