[發明專利]一種小鼠胃癌模型的建立方法

在審

• 申請號: 202111245915.5
• 申請日: 2021-10-26
• 公開（公告）號: CN113940310A
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 汪洌;陳晶;陳健;丁燕霞;王貝迪
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 浙江專橙律師事務所 33313
• 代理人: 朱孔妙

本發明公開了一種小鼠胃癌模型的建立方法，屬于胃癌模型領域。一種小鼠胃癌模型的建立方法，首先收集在微需氧環境中培養擴增的H.felis幽門螺桿菌至腦心浸液液體，在培養基中制成均質菌液；然后對禁食的實驗小鼠予新鮮制備的均質菌液灌胃，每隔1天灌胃1次，共灌胃5次，最后用盛于避光容器中飲用液體飼喂灌胃完成后的實驗小鼠，連續飼喂1周記為1次，每隔一周飼喂1次，共5次，飲用液體為用小鼠飲用水新鮮配置的含有N?甲基?N?亞硝基脲濃度為240ppm的液體；獲得了原發性小鼠胃癌模型，極大的提升小鼠存活率以及胃部腫瘤發生的概率，同時保證了胃黏膜局部免疫微環境為幽門螺桿菌特異性，更適合用于相關的免疫學研究。

技術領域

本發明涉及胃癌模型領域，更具體地說，涉及一種小鼠胃癌模型的建立方法。

背景技術

由于缺乏成熟穩定的鼠源胃癌細胞系，種植人源胃癌細胞又存在構建人源化小鼠的技術及倫理問題，使得利用動物模型展開胃癌免疫相關的實驗研究受到了極大限制。誘導小鼠自發胃癌是可行性最高的策略。

但目前對小鼠自發胃癌誘導過程中存在以下問題：

1.傳統的試驗采用昆明品種的小鼠，雖然能夠誘導胃癌發生，但是胃癌發生率較低，且不便于得到穩定性及一致性較高的模型，不適合用于免疫學研究，而能夠得到穩定性及一致性較高模型的C57BL/6小鼠，自發胃癌概率極低，通過化學致癌物進行誘導可能對其他器官帶來嚴重損害；而長期感染幽門螺桿菌的小鼠只能達到慢性胃炎，癌變的概率極低，幾乎終生無法進展至胃癌。

2.常用的人源幽門螺桿菌菌株雖可以在小鼠中引起一過性胃炎，可在一定程度上模擬人體感染的情況，但難以長期定植，且無法誘導出慢性炎癥后期的惡性病變。極少數利用臨床分離的幽門螺桿菌菌株，雖為CagA和VagA陽性，但仍為人種屬特異的菌株。

3.亞硝基胍類為較強的致癌化學物，不僅僅會誘導胃黏膜局部發生病變，對于全身各個器官都有一定的致癌作用。

4.根據參考文獻及預實驗結果，MNU的濃度、飼喂方式等均在很大程度上影響最終造模結果。由于小鼠胃部結構不同于人，存在沒有腺體結構的“前胃”部分，而已有技術采用的灌胃的方式大概率會誘導前胃產生鱗癌，而不是臨床上常見的，由腺上皮惡化而來的腺癌。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種小鼠胃癌模型的建立方法。

為解決上述問題，本發明采用如下的技術方案。

一種小鼠胃癌模型的建立方法，包括：

a.對實驗小鼠禁食14～18小時，最好是16小時；

b.收集在微需氧環境中培養擴增的H.felis幽門螺桿菌，在腦心浸液（BHI）液體培養基中制成均質菌液，測定OD₆₀₀值在1.8～2.2之間，優選2.0；

c.待步驟b完成后，對步驟a禁食后的實驗小鼠予步驟b中新鮮制備的均質菌液灌胃，每隔1天灌胃1次，共灌胃5次；

d.用小鼠飲用水新鮮配置含有N-甲基-N-亞硝基脲濃度為240ppm的飲用液體，盛于避光容器中飼喂步驟c灌胃完成后的實驗小鼠，連續飼喂1周記為1次，每隔一周飼喂1次，共5次；

e.待步驟d完成后，確認幽門螺桿菌定植和癌變發生。

進一步的，所述步驟a中實驗小鼠均為免疫功能健全的5～7周大的C57BL/6雌鼠。體重范圍優選為20～25g。

進一步的，所述步驟a中實驗小鼠灌胃的量為按小鼠體重5ml/kg，灌100μl～130μl/鼠，每隔一天灌胃1次，在第一天時先不灌胃。

進一步的，所述步驟b中微需氧環境含有6-12%氧氣及5-8%二氧化碳。

進一步的，所述步驟d中小鼠飲用液體是用普通高溫高壓滅菌水配置的濃度為240ppmMNU。