[發(fā)明專利]一種基于微衛(wèi)星標記的花鱸親子鑒定的引物及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111229080.4
• 申請日: 2021-10-21
• 公開（公告）號: CN113774152B
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 邱麗華;范嗣剛;黃皓;王鵬飛;趙超;劉勇;閆路路;張博;古群紅;李勇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學研究院南海水產(chǎn)研究所;珠海市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展中心（珠海市金灣區(qū)臺灣農(nóng)民創(chuàng)業(yè)園管理委員會;珠海市農(nóng)漁業(yè)科研與推廣中心）
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廣州海心聯(lián)合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 高東陽;馬赟齋

1.一種基于微衛(wèi)星標記的引物在制備花鱸親子鑒定試劑盒中的應用，其特征是，所述引物為以下位點的8對微衛(wèi)星標記熒光引物：

Lm16-281位點：

Lm16-281?F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示，Lm16-281?R的核苷酸序列如SEQ?IDNO.10所示；

Lm16-189位點：

Lm16-189?F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.11所示，Lm16-189?R的核苷酸序列如SEQ?IDNO.12所示；

Lm3-111位點：

Lm3-111?F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.13所示，Lm3-111?R的核苷酸序列如SEQ?IDNO.14所示；

Lm3-129位點：

Lm3-129?F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.15所示，Lm3-129?R的核苷酸序列如SEQ?IDNO.16所示；

F3位點：

F3?F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.17所示，F(xiàn)3?R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.18所示；

Lm16-245位點：

Lm16-245?F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示，Lm16-245?R的核苷酸序列如SEQ?IDNO.20所示；

Lm2-1091位點：

Lm2-1091?F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.21所示，

Lm2-1091?R的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.22所示；

Lm16-267位點：

Lm16-267?F的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.23所示，Lm16-267?R的核苷酸序列如SEQ?IDNO.24所示。

2.基于微衛(wèi)星標記的花鱸親子鑒定方法，其特征是，包括以下步驟：

(1)花鱸基因組DNA提取：采集花鱸親本和子代的組織樣品，分別提取基因組DNA；

(2)合成權(quán)利要求1所述的8對微衛(wèi)星標記熒光引物；

(3)多重PCR反應擴增：分別取所述步驟(1)獲取的親本和子代的花鱸基因組DNA和步驟(2)合成的所述8對微衛(wèi)星標記熒光引物進行多重PCR反應；

(4)基因分型：通過自動測序儀對所述步驟(3)的多重PCR反應產(chǎn)物進行毛細管電泳基因分型，利用GeneMarker?v1.91軟件讀取等位基因值；

(5)親子關系判定：使用Cervus?v3.0軟件計算子代個體與候選親本的似然率對數(shù)值LOD，確定親子關系；其中，LOD0，子代個體和親本不存在親子關系；LOD＝0，子代個體和親本親子關系不確定；LOD0，子代個體和親本存在親子關系。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于微衛(wèi)星標記的花鱸親子鑒定方法，其特征是，所述步驟(3)中，多重PCR反應程序：95℃預變性10min，95℃變性40s，58℃退火30s，72℃延伸60s，共34個循環(huán)，72℃終延伸5min，4℃保存。