[發(fā)明專利]渤海三疣梭子蟹原種的微衛(wèi)星標(biāo)記、其引物及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111229002.4
• 申請(qǐng)日: 2021-10-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114015785A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康現(xiàn)江;段保華;穆淑梅;李澤健;管越強(qiáng);李彥芹;劉偉彪;田洋;任沛希;姬新東
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 石家莊國(guó)域?qū)＠虡?biāo)事務(wù)所有限公司 13112
• 代理人: 張莉靜

本發(fā)明提供了一種渤海三疣梭子蟹原種的微衛(wèi)星標(biāo)記、其引物及應(yīng)用，包括微衛(wèi)星標(biāo)記ZL05，其序列如SEQ ID NO.1所示；微衛(wèi)星標(biāo)記PrMa01，其序列如SEQ ID NO.2所示；微衛(wèi)星標(biāo)記PrMa03，其序列如SEQ ID NO.3所示；微衛(wèi)星標(biāo)記PrMa04，其序列如SEQ ID NO.4所示。所述微衛(wèi)星標(biāo)記ZL05與三疣梭子蟹的全甲寬性狀相關(guān)聯(lián)；所述微衛(wèi)星標(biāo)記PrMa01、PrMa03、PrMa04均與三疣梭子蟹的全甲寬、背甲底寬、背甲長(zhǎng)、螯肢掌節(jié)長(zhǎng)、螯肢長(zhǎng)節(jié)長(zhǎng)、體高和體重性狀相關(guān)聯(lián)。本發(fā)明提供微衛(wèi)星標(biāo)記，其多態(tài)性高，PCR擴(kuò)增穩(wěn)定，可用于對(duì)渤海三疣梭子蟹原種進(jìn)行標(biāo)記。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及三疣梭子蟹生物學(xué)遺傳育種領(lǐng)域，具體地說(shuō)是涉及一種渤海三疣梭子蟹原種的微衛(wèi)星標(biāo)記、其引物及應(yīng)用。

背景技術(shù)

SSR(Simple Sequence Repeat)即簡(jiǎn)單序列重復(fù)，又稱為微衛(wèi)星DNA(microsatellite DNA)，廣泛分布于真核生物基因組中，它以少數(shù)幾個(gè)(1-6bp)短核苷酸為基本單位，首尾相連組成串聯(lián)重復(fù)的DNA序列，即核心序列。核心序列重復(fù)次數(shù)越多，其等位基因數(shù)量就越多，多態(tài)性也就越豐富。位于核心序列兩端的側(cè)翼序列是相對(duì)保守的單拷貝序列，可根據(jù)其特性設(shè)計(jì)特異性引物，用于擴(kuò)增微衛(wèi)星序列。

與其它分子標(biāo)記如擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(Amplified Fragment LengthPolymorphism,AFLP)、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(Randomly Amplified Polymorphic DNA,RAPD)等分子標(biāo)記技術(shù)相比較，SSR標(biāo)記具有以下特點(diǎn)：①?gòu)V泛分布于真核生物基因組中，大約每隔10-15kb就存在一個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)；②數(shù)量多，多態(tài)性豐富；③具有多等位基因的特性，信息含量大；④呈共顯性遺傳，即能區(qū)分純合子和雜合子；⑤等位基因的分離遵循孟德?tīng)栆?guī)律；⑥實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單、結(jié)果穩(wěn)定可靠；⑦基于PCR技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè)；⑧具有連鎖不平衡現(xiàn)象；⑨重復(fù)性較好。SSR標(biāo)記技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于生物遺傳連鎖圖譜構(gòu)建、遺傳多樣性分析，QTL定位、分子標(biāo)記輔助育種和種質(zhì)資源鑒定等方面。

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)隸屬甲殼綱(Crustacea)、十足目(Decapoda)、梭子蟹科(Portunidae)、梭子蟹屬，是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)蟹類，主要分布在中國(guó)的遼寧、河北、山東、江蘇、福建，日本以及韓國(guó)等海域。其生長(zhǎng)迅速、肉味鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，具有較高的商業(yè)價(jià)值。近年來(lái)，過(guò)度捕撈和環(huán)境污染使渤海三疣梭子蟹野生資源減少，跨區(qū)域引種和育苗使渤海三疣梭子蟹種質(zhì)混雜。渤海三疣梭子蟹野生資源的減少使原種數(shù)量下降，加大了原種保育難度。因此，利用三疣梭子蟹SSR標(biāo)記與重要生長(zhǎng)性狀進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析，并通過(guò)與黃海、東海數(shù)據(jù)對(duì)比，從中篩選出渤海三疣梭子蟹原種標(biāo)記，這對(duì)渤海三疣梭子蟹的原種保育非常重要，對(duì)渤海三疣梭子蟹原種資源的保護(hù)和可持續(xù)利用具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一種渤海三疣梭子蟹原種的微衛(wèi)星標(biāo)記、其引物及應(yīng)用，以提供一套渤海三疣梭子蟹的原種標(biāo)記，為渤海三疣梭子蟹種質(zhì)資源現(xiàn)狀的調(diào)查研究以及對(duì)原種進(jìn)行標(biāo)記和保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。

本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種渤海三疣梭子蟹原種的微衛(wèi)星標(biāo)記，包括：

微衛(wèi)星標(biāo)記ZL05，其序列如SEQ ID NO.1所示；

微衛(wèi)星標(biāo)記PrMa01，其序列如SEQ ID NO.2所示；

微衛(wèi)星標(biāo)記PrMa03，其序列如SEQ ID NO.3所示；

微衛(wèi)星標(biāo)記PrMa04，其序列如SEQ ID NO.4所示。

所述微衛(wèi)星標(biāo)記ZL05與三疣梭子蟹的全甲寬性狀相關(guān)聯(lián)；所述微衛(wèi)星標(biāo)記PrMa01、PrMa03、PrMa04均與三疣梭子蟹的全甲寬、背甲底寬、背甲長(zhǎng)、螯肢掌節(jié)長(zhǎng)、螯肢長(zhǎng)節(jié)長(zhǎng)、體高和體重性狀相關(guān)聯(lián)。