[發明專利]燕窩中氨基酸的超高效液相色譜-串聯質譜測定方法

在審

• 申請號: 202111222555.7
• 申請日: 2021-10-20
• 公開（公告）號: CN113804806A
• 公開（公告）日: 2021-12-17
• 發明（設計）人: 范群艷;白偉娟;柳訓才;張曉婷;林素瓊;李有泉
• 申請（專利權）人: 廈門市燕之屋絲濃食品有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開了一種燕窩中氨基酸的超高效液相色譜?串聯質譜測定方法，屬于分析檢測技術領域。本發明通過利用超高效液相色譜串聯質譜(LC?MS/MS)，建立了燕窩中氨基酸的定量檢測方法。通過采用酸水解聯合凍干與堿水解的樣品前處理方法，避免樣品在水解過程中氨基酸被破壞而無法測量的問題，以及通過利用C18?AQ色譜柱進行色譜分離和質譜檢測器對燕窩中氨基酸含量進行檢測，在12分鐘內即可完成燕窩中多種氨基酸成分含量的分析。本發明公開的測定方法操作簡單快速、準確性高、靈敏且重現性好，適用于燕窩及其他富含蛋白質食品中氨基酸含量的快速檢測。

技術領域

本發明屬于分析檢測技術領域，尤其涉及燕窩中氨基酸的超高效液相色譜-串聯質譜測定方法。

背景技術

燕窩為雨燕科(Apodidae)金絲燕屬(Collocalia)中的6種金絲燕在繁殖的季節時分泌出的唾液或唾液與它的羽毛凝結筑就的巢穴。燕窩長期以來被視為一種藥食同源的保健食材，養顏美容、潤肺生津。燕窩即可作為食材，又可入藥，富含蛋白質、氨基酸、唾液酸和無機元素等，研究表明燕窩具有抗氧化、改善免疫、延緩衰老、抗病毒、抑制血凝、調節腸道菌群等功效。

目前對氨基酸檢測方法有熒光光譜法、分光光度發、毛細電泳法、近紅外光譜法、化學發光法、高效液相色譜法、氣相色譜與質譜聯用法、液相色譜與質譜聯用法、氨基酸自動分析儀等。燕窩中氨基酸檢測大部分采用氨基酸自動分析儀，離子交換樹脂易壓縮，流動相流速的加快不與壓力的增加成比例，故測定時間相對較長；氨基酸經離子交換柱分離，在柱后與水合茚三酮衍生劑混合進行反應，易造成柱后擴散比較大，峰形變寬，分辨率降低。

因此，研究出一種操作簡單、方法快速、準確、重復性好、成本低的燕窩中氨基酸檢測方法是本領域技術人員亟待解決的技術難題。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是針對現有技術中存在的問題，提供了一種超高效液相色譜-串聯質譜聯用技術檢測燕窩中氨基酸的檢測方法，該方法樣品無需衍生、操作簡單快速、準確、重復性好，適用于燕窩中氨基酸快速測定。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種燕窩中氨基酸的超高效液相色譜-串聯質譜測定方法，具體步驟包括：

(1)燕窩樣品前處理：將燕窩粉碎分成兩份，一份進行酸水解、定容、稀釋、凍干、溶解、定容作為酸水解待測樣品；另一份進行堿水解、定容、稀釋作為堿水解待測樣品。

(2)將待測樣品與標準物質分別進行超高效液相色譜-串聯質譜聯用檢測分析，通過比較待測樣品與標準物質的譜圖(峰面積、保留時間)，判斷待測樣品中是否含有氨基酸，標準物質中含有相關的氨基酸標準物質。

優選的，所述超高效液相色譜-串聯質譜聯用的條件包括：液相色譜條件和質譜條件。

優選的，液相色譜條件包括色譜柱為C18-AQ，流速：300μL/min，柱溫：40℃，以300μL/min的流速進行梯度洗脫。

優選的，質譜條件包括電噴霧離子化電離源ESI，正離子多反應監測(MRM)。

優選的，正離子多反應監測包括：接口電壓：2.5kv；霧化氣流量：3L/min；加熱氣流量：10L/min；接口溫度：300℃；DL溫度：250℃；加熱塊溫度：400℃；干燥氣流量：10L/min；CID氣：270kpa。

優選的，所述梯度洗脫采用流動相A和流動相B組成，其中流動相A為0.05％甲酸水溶液，流動相B為甲醇。