[發明專利]一種NK細胞無血清培養基及其用途

有效

• 申請號: 202111213232.1
• 申請日: 2021-10-19
• 公開（公告）號: CN113652400B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 林家會;馬士棋;陳旭;陳剛
• 申請（專利權）人: 依科賽生物科技（太倉）有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 趙海鵬

本發明公開了一種NK細胞無血清培養基及其用途，所述NK細胞無血清培養基由基礎培養基和添加組分混合配制而成，所述添加組分由rhIL?2，rhIL?15，rhIL?21，他克莫司，甲羥戊酸，異戊二烯焦磷酸鹽，重組人胰島素，重組人脫鐵轉鐵蛋白，重組人血清白蛋白，丙酮酸鈉，亞油酸，膽固醇，亞葉酸組成，所述基礎培養基是IMDM。本發明的培養基不僅化學成分明確，無血清，無人源和動物源成分，配方簡單，性能優異，同時在無血清培養基中加入FK506，在保證細胞高活率同時，可以顯著提高NK細胞的擴增速度，NK細胞培養至17天可擴增700倍以上，收獲時細胞活率可達95%以上。

技術領域

本發明涉及培養基技術領域，具體為一種NK細胞無血清培養基及其用途。

背景技術

自然殺傷細胞，即NK細胞（Natural Killer Cell），是與T細胞、B細胞齊名卻又不同于兩者的一類淋巴細胞，同時對人體內的T淋巴細胞及B淋巴細胞具有一定的調節作用。NK細胞是與特異性免疫應答無關的一類免疫細胞，它所介導的細胞裂解不受主要組織相溶性復合體（MHC）的影響，故也稱其為機體天然免疫系統的“心臟”。

作為機體的第一道防線，NK細胞不僅能夠清除細胞內寄生菌、病毒及老化變異細胞，對癌細胞也具有極強的清除作用，并且在不發生預先致敏的條件下可實現迅速活化，具備強大的抗感染、抗腫瘤作用。因此，目前在臨床上利用NK細胞過繼性免疫治療成為了腫瘤細胞免疫治療的重要手段。

由于常用NK細胞培養液添加有一定比例的異種動物來源的血清，而血清成分復雜，存在批間差異，這些都容易影響NK細胞培養的穩定性，加上血清中存在的異源物質，容易引起異種動物病原體感染或異種動物源成分的殘留，在臨床使用上存在一定風險。因此，在臨床上，使用無血清培養基是對NK細胞進行擴增的基礎。但現有的無血清培養基，多數會添加人AB血清或人血清白蛋白等成分，增加了成分的復雜程度，雖然避免了引入異種動物源成分，但受原料來源的影響，可能會有感染艾滋病、乙肝等傳染疾病的風險，極大地提高了對于產品質控的要求。且目前的無血清NK細胞培養基則普遍存在效能差，細胞擴增倍數差且生物活性低等問題，故采用安全可靠、化學成分明確的無血清NK細胞培養基，對其后續在臨床上的應用極為關鍵。

專利文獻CN104928241B，公開日2018.04.13，公開了一種體外活化擴增NK細胞的培養液，所述NK細胞培養液重組人胰島素、重組人轉鐵蛋白、谷氨酰胺、重組人白蛋白、維生素PP、氫化可的松、微量元素。上述專利文獻公開的NK細胞培養液在開發的整個培養基體系中沒有引入非人源性蛋白，因而避免了培養基混入人源成分或其他動物來源成分。但培養細胞時需要添加離體人血漿，且擴增效率稍顯不足，細胞質量有待提高。因此有必要提供擴增效率高，培養的細胞質量更優良的無血清、無人源、無動物源成分的NK細胞培養基。

發明內容

本發明的目的在于提供一種NK細胞無血清培養基及其用途，以解決上述背景技術中提出的問題。

為了解決上述技術問題，本發明提供如下技術方案：

一種NK細胞無血清培養基，所述培養基包括基礎培養基和添加組分，所述添加組分包括rhIL-2、rhIL-15、rhIL-21、FK506、甲羥戊酸、GGPP、重組人胰島素、重組人脫鐵轉鐵蛋白、重組人血清白蛋白、丙酮酸鈉、亞油酸、膽固醇、亞葉酸。

較優化的方案，以所述添加組分的體積計，所述添加組分各成分的含量如下：rhIL-2 0.1～20 ng/mL、rhIL-15 10～100 ng/mL、rhIL-21 0.1～20 ng/mL、FK506 10-100ng/mL、甲羥戊酸0.5～5 μg/mL、GGPP 2～10 μg/mL，重組人胰島素 0.01～15 μg/mL、重組脫鐵轉鐵蛋白 0.1～10 μg/mL、重組人血清白蛋白 0.1～5 mg/mL、丙酮酸鈉 1～100 μg/mL、亞油酸 0.05～10 μg/mL、膽固醇 0.1～10 μg/mL、亞葉酸 0.05～10 μg/mL。