[發(fā)明專利]一種羊源嵴病毒VP1重組蛋白、ELISA檢測試劑盒及其制備方法與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111210240.0
• 申請日: 2021-10-18
• 公開（公告）號: CN113929754A
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 湯承;岳華;王遠微;阿比克哈莫
• 申請（專利權(quán)）人: 西南民族大學(xué)
• 主分類號: C07K14/085
• 分類號: C07K14/085;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/569;G01N33/543;C12R1/19
• 代理公司: 成都華風(fēng)專利事務(wù)所(普通合伙) 51223
• 代理人: 杜朗宇

本發(fā)明公開了一種羊源嵴病毒VP1重組蛋白、ELISA檢測試劑盒及其制備方法與應(yīng)用。該羊源嵴病毒VP1重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。該羊源嵴病毒VP1重組蛋白的制備方法包括：提取羊源嵴病毒核酸后進行擴增后，優(yōu)化基因序列得到優(yōu)化核苷酸序列，構(gòu)建重組原核表達載體、誘導(dǎo)表達及純化得到。本發(fā)明還提供了一種ELISA檢測試劑盒，主要包括包被有羊源嵴病毒VP1重組蛋白的ELISA酶標板。本發(fā)明羊源嵴病毒VP1重組蛋白特異性高，易純化制備、成本低，可作為抗原能夠簡便、快速、準確的檢測出待測血液樣品中的嵴病毒抗體；本發(fā)明ELISA檢測試劑盒可以準確測定羊體內(nèi)抗VP1重組蛋白抗體，可用于疫苗免疫后羊血清抗體的檢測以協(xié)助判斷疫苗的免疫效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種羊源嵴病毒VP1重組蛋白、ELISA檢測試劑盒及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

Kobuvirus(KoV)是小RNA病毒科(Picornaviridae)嵴病毒屬(kobuvirus)的成員，嵴病毒屬在第八次病毒學(xué)分類報告后被納入微小核糖核酸病毒科，嵴病毒屬成員為無囊膜的、單股正鏈RNA病毒。嵴病毒和其他微小核糖核酸病毒類似，在酸性環(huán)境中(pH3.5)相對穩(wěn)定，耐氯仿、乙醚和非離子去污劑，但是不耐熱，60℃條件下30min就會崩解。

嵴病毒宿主范圍廣，其最早在日本從患有急性胃腸炎人的腹瀉糞便樣本中檢測到，之后從狗、貓、豬、老鼠、土撥鼠、大鼠、雪貂、山羊、兔子、蝙蝠、鳥類以及污水等中都發(fā)現(xiàn)該病毒，目前，已從人、牛和豬身上分離得到該病毒。嵴病毒屬成員根據(jù)宿主可分為:人愛知病毒(Aichi virus)、牛嵴病毒(Bovine kobuvirus)、豬嵴病毒(Porcine kobuvirus)等。2013年，國際病毒分類委員會(ICTV)對嵴病毒屬成員重新分類命名，規(guī)定現(xiàn)有嵴病毒屬包括Aichivirus A-Aichivirus F，其中Aichivirus A包括人愛知病毒(Aichivirus)、犬嵴病毒(Canine kobuvirus)、鼠嵴病毒(Murine kobuvirus)、貓嵴病毒(Feline kobuvirus)和輪蟲嵴病毒(Roller kobuvirus)；Aichivirus B包括牛嵴病毒(Bovine kobuvirus)和綿羊嵴病毒(Sheep kobuvirus)；Aichivirus C目前有豬嵴病毒(Porcine kobuvirus)和山羊嵴病毒(Caprine kobuvirus)；Aichivirus D目前有牛嵴病毒(Bovine kobuvirus)；Aichivirus E目前有兔嵴病毒(Rabbit kobuvirus)；Aichivirus F目前有蝙蝠嵴病毒(Batkobuvirus)。

目前，在羊中鑒定了3個種的KoVs：Aichivirus B，Aichivirus C和Aichivirus D，能引起羊引起腸道損傷(尤其在結(jié)腸最嚴重)和嚴重腹瀉，證明其是致腹瀉病毒。目前該病毒已在韓國，意大利，匈牙利，美國等8個國家的犢牛腹瀉糞便樣本中檢出，檢出率為2.6％～9.4％。KoV基因組由病毒末端結(jié)合蛋白(vpg)、5′端非編碼區(qū)(5′UTR)、1個開放閱讀框(ORF)以及3′端非編碼區(qū)(3′UTR)和聚(A)尾組成。ORF包括氨基端的非結(jié)構(gòu)蛋白L(Leaderprotein)，3種結(jié)構(gòu)蛋白P1(VP0、VP3和VP1)、7種非結(jié)構(gòu)蛋白P2(2A-2C)和P3(3A-3D)。KoVVP0和VP1蛋白參與宿主細胞受體的識別和致病性，在病毒感染過程中發(fā)揮重要作用。VP1暴露于病毒顆粒的表面，承受的免疫選擇壓力最大，使得VP1易發(fā)生變異，因此該蛋白是KoV中高變的免疫決定蛋白，另外，該蛋白含有一個高度保守的脯氨酸基序，該基序被認為是受體結(jié)合位點，在病毒入侵和免疫保護中起著關(guān)鍵作用，并且該蛋白是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生中和抗體的主要成分，也是最重要的抗原位點以及抗原變異的關(guān)鍵，因此，VP1蛋白在庫布病毒分子流行病學(xué)調(diào)查、疫源的追蹤、毒株分型、基因工程苗的研制、診斷方法的建立等領(lǐng)域一直是國內(nèi)外研究者關(guān)注的熱點。