[發明專利]一種與ICP輔助診斷相關的血清/血漿外泌體miRNA標志物及其應用

有效

• 申請號: 202111204374.1
• 申請日: 2021-10-15
• 公開（公告）號: CN114032297B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 張婷;羅亮;孫秀蘭;董蕊銳;孫嘉笛;葉寧珍;王高瑩;王晶;陳敏健;趙紹杰;姚婷婷
• 申請（專利權）人: 無錫市婦幼保健院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/113;C12N15/11
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

本發明公開了一種與妊娠期肝內膽汁淤積癥輔助診斷相關的血清/血漿外泌體miRNA標志物及其應用。一種與ICP輔助診斷相關的血清/血漿外泌體miRNA標志物，由has?miR?4271和has?miR?1275組成。所述的血清/血漿外泌體miRNA標志物的引物。所述的引物在制備ICP輔助診斷試劑盒中的應用。發明人通過分離和研究初產、單胎妊娠的ICP病例和與其年齡匹配的健康孕婦對照血清/血漿外泌體中的miRNAs，尋找一組與ICP發病高度相關的高特異性和敏感性的外泌體miRNAs，并研制出可便于臨床應用的ICP輔助診斷試劑盒，為ICP的篩查和診斷治療提供實驗室支持。

發明領域

本發明屬于基因工程及生殖醫學領域，涉及一種與妊娠期肝內膽汁淤積癥輔助診斷相關的血清/血漿外泌體miRNA標志物及其應用。

背景技術

妊娠期肝內膽汁淤積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)是一類好發于妊娠中晚期的妊娠期并發癥。ICP患者的臨床特征以不明原因的皮膚瘙癢為主，實驗室檢查發現血清中肝酶水平和總膽汁酸水平顯著升高。ICP的發病率可高達12.0％，雖然其對母體健康威脅較小，但卻對胎兒傷害較大。ICP可引起胎兒宮內窘迫、自發性早產、死胎等多種并發癥，增加圍產兒發病率和死亡率。有研究表明，ICP圍產兒的死亡率約為正常妊娠者的6-10倍。然而迄今為止，ICP的發病機制尚未完全明確。如何有效早期診斷、早期干預及合理治療ICP一直是圍生醫學領域面臨的嚴峻挑戰之一。目前臨床上對于ICP的診斷監測主要依賴總膽汁酸等生化指標的篩查，但其靈敏性及特異性均較低，無法實現早期預警和有效監控。因此，探究ICP發生的早期敏感分子事件，尋找易感生物標志物(susceptiblebiomarker)可為ICP的早期診斷和實施干預提供有效手段，對于促進人類母嬰健康具有重大的科學意義。

外泌體(exosome)是細胞外囊泡的一個子集，是一種脂質雙分子層包裹的小囊泡，直徑約30-150nm，密度約為1.13-1.21g/ml，形狀為球形、扁球形或杯狀結構。外泌體存在于血清、尿液、唾液、胸腔積液等多種體液。作為分子診斷標志物，外泌體具有天然優勢，其內的核酸物質可被外泌體包裹，防止降解。另外，外泌體的形成過程與母細胞關系密切，導致外泌體內分子標志物比傳統的分子標志物特異性更高。MicroRNAs(即miRNAs)是近年來分子生物學研究領域的另一個熱點，它的成熟狀態是一類長約18-24個核苷酸的小非編碼單鏈RNA分子，進化上具有高度保守性。miRNA的主要功能是調節生物體內在的與機體生長、發育、疾病發生過程有關的基因的表達。近年來，miRNA與疾病的關系已經成為研究的熱點和重點，且miRNA已被證實可以作為多種妊娠期并發癥的診斷和預后標志物。

外泌體的膜性囊泡結構具有保護miRNA的作用，使miRNA可以免受RNA酶和胰蛋白酶等分解作用，保證其穩定存在于外周血中。研究已經證實血清/血漿外泌體中存在幾百種的miRNAs，這些小分子RNAs性質穩定、含量豐富、易于定量檢測，且存在顯著的疾病特異性。現有的成熟的技術，包括外泌體的提取和定量檢測miRNA分子的技術，表明利用血清外泌體miRNAs作為分子生物標志物的方法比傳統的特異蛋白分子標記方法更加穩定且有效，為生物標志物開拓了新境界。

然而，目前還沒有用于ICP輔助診斷的較為穩定的分子生物標志物的報道，若能篩選出ICP特異或異常表達的血清/血漿外泌體miRNAs作為生物標志物，并研制相應的輔助診斷試劑盒，將極大改善我國ICP的診斷現狀，具有非常廣闊的臨床應用前景。

發明內容

本發明的首要目的是針對上述技術問題，提出一種與ICP輔助診斷相關的血清/血漿外泌體miRNA標志物。

本發明的第二個目的是提供上述血清/血漿外泌體miRNA標志物的引物。

本發明的第三個目的是提供上述血清/血漿外泌體miRNA標志物及其引物在制備ICP輔助診斷試劑盒中的應用。

本發明第四個目的是提供用于ICP輔助診斷的試劑盒。