[發(fā)明專利]腸炎沙門氏菌噬菌體SEP37及其電化學(xué)阻抗譜傳感器和檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111197364.X
• 申請(qǐng)日: 2021-10-14
• 公開（公告）號(hào): CN113999820B
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王小紅;王吉;李慧慧;丁一峰;朱文娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N7/00
• 分類號(hào): C12N7/00;C12Q1/10;C12Q1/00;G01N27/26;G01N27/02;C12R1/92
• 代理公司: 武漢開元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 馮超;劉琳

1.一株腸炎沙門氏菌噬菌體（Salmonellaenteritidis?bacteriophage）SEP37，其保藏編號(hào)：CCTCC?NO：M?20211127。

2.一種基于噬菌體的檢測(cè)沙門氏菌的電化學(xué)阻抗譜生物傳感器，其特征在于：所述傳感器以權(quán)利要求1所述噬菌體為生物識(shí)別元件，且所述傳感器由包含三電極的測(cè)量裝置，氮?dú)夤?yīng)裝置，?P4000A-PARSTAT?4000A電化學(xué)分析儀組成，該電化學(xué)分析儀與上級(jí)計(jì)算機(jī)實(shí)現(xiàn)通訊。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述電化學(xué)阻抗譜生物傳感器，其特征在于：所述包含三電極的測(cè)量裝置包括含有氧化還原探針的反應(yīng)器和置于氧化還原探針中的三電極，所述三電極分別為工作電極、鉑絲對(duì)電極、Ag/AgCl參比電極；所述氧化還原探針為含有鐵氰化鉀、亞鐵氰化鉀和氯化鉀的混合水溶液；其中，混合水溶液中，鐵氰化鉀、亞鐵氰化鉀的摩爾濃度均為0.5mmol/L，氯化鉀的摩爾濃度為0.1?mol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述電化學(xué)阻抗譜生物傳感器，其特征在于：所述工作電極由以下步驟制作而成：

1）將金盤電極機(jī)械打磨拋光，清洗，活化；

2）將金納米顆粒物理沉積至金盤電極的工作面，得到GDE-AuNPs；

3）然后將GDE-AuNPs浸入4?℃的巰基乙胺溶液中12?h，得到GDE-AuNPs-Cys；

4）再將GDE-AuNPs-Cys浸入活化的噬菌體SEP37懸液中4?h，得到GDE-AuNPs-Cys-PhageSEP37；

5）?最后將GDE-AuNPs-Cys-PhageSEP37與牛血清白蛋白溶液共孵育30?min，沖洗，得到工作電極。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述電化學(xué)阻抗譜生物傳感器，其特征在于：所述金盤電極直徑為2mm，

所述步驟2）中，金納米顆粒直徑為25~30?nm，

巰基乙胺的使用摩爾濃度為1?mmol/L，

腸炎沙門氏菌噬菌體SEP37的使用滴度為：5×10¹⁰?PFU/mL，

牛血清白蛋白的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%。

6.一種利用權(quán)利要求3~5中任意一項(xiàng)所述電化學(xué)阻抗譜生物傳感器檢測(cè)沙門氏菌的方法，其特征在于：該方法為非診斷目的方法，包括以下步驟：

1）首先將工作電極浸入待測(cè)溶液中并輕微擾動(dòng)溶液，使腸炎沙門氏菌噬菌體SEP37捕獲待測(cè)溶液中的沙門氏菌；

2）將捕獲沙門氏菌后的工作電極用無菌蒸餾水輕柔沖洗，并將工作電極安裝至三電極測(cè)量裝置中，測(cè)量開始前先向含有氧化還原探針的反應(yīng)器中通入高純氮?dú)馇覝y(cè)量過程一直維持在氮?dú)夥諊校?/p>

3）使用電化學(xué)分析儀進(jìn)行電化學(xué)阻抗譜EIS測(cè)量，并使用軟件VSimpVin?3.60擬合電極表面電荷轉(zhuǎn)移阻抗值進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述電化學(xué)分析儀的運(yùn)行參數(shù)為：交流擾動(dòng)振幅為10?mV。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于：所述電化學(xué)分析儀的檢測(cè)的頻率為0.1~10⁵Hz。