[發明專利]外周血外泌體miRNA聯合標志物在制備檢測HBV陽性肝硬化早期肝癌試劑盒中的應用

有效

• 申請號: 202111197320.7
• 申請日: 2021-10-14
• 公開（公告）號: CN113755597B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 陳健翔;常存杰;李騫;喬逸婷;董衡;孫孟情;陳保東;孟瑤
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 朱亞冠

本發明公開一種外周血外泌體miRNA聯合標志物在制備檢測早期肝癌試劑盒中的應用。miRNA聯合標志物為來源于血漿外泌體的hsa?miR?1307?3p、hsa?miR?221?3p、hsa?miR?323b?3p、hsa?miR?150?5p、hsa?miR?134?5p、hsa?miR?4433b?3p、hsa?miR?222?3p。早期肝癌為HBV陽性(HBV+)且肝硬化(LC+)的原發性HCC。本發明針對HBV陽性(HBV+)且肝硬化(LC+)的原發性HCC予以檢測，針對性更強，檢測結果也更有說服力。

技術領域

本發明涉及分子生物學和醫學診斷領域，具體涉及一種外周血外泌體miRNA聯合標志物在制備檢測早期肝癌試劑盒中的應用。

背景技術

原發性肝癌是世界范圍內發病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。肝細胞癌(HCC)是原發性肝癌的主要形式，通常由肝硬化、HBV感染等慢性肝病演化而來。早期HCC五年生存率為50％-70％，而晚期肝癌患者僅為10％-19％，因此，早診早篩是肝癌治療的關鍵。由于缺乏有效區分早期肝癌患者和慢性肝病患者的早期診斷方法，目前HCC的診斷主要還是依賴于影像學、血清AFP和組織活檢，具有一定的滯后性，大多數患者在初診時已經是晚期。因此，臨床上亟需開發新型生物標志物用于肝癌患者的早期診斷。

外泌體(exosome)是一類直徑大小在40-160nm(平均100nm)，能被大多數細胞分泌，進入血液循環系統的胞外囊泡。外泌體攜帶了膜蛋白、核蛋白、DNA、mRNA、非編碼RNA等生物信息，參與細胞活動的重要調控，在腫瘤轉移、免疫調控機制、疾病發生發展中發揮重要作用。微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長度在19-24nt的非編碼單鏈RNA，一般通過與目標信使RNA(mRNA)部分或完全的互補配對，導致mRNA的降解或翻譯的抑制，起到轉錄后調控的作用，在生物發育的各個環節，以及包括腫瘤在內的多種疾病的發生發展中發揮功能。同時，相比于外泌體中其他類型的生物信息，miRNA片段更小，更為穩定。因此，來源于外泌體的miRNA可作為一類潛在的腫瘤分子標志物。

本領域已發現has-miR-29a、has-miR-29c、has-miR-133a、has-miR-143、has-miR-145、has-miR-192、has-miR-505等7個miRNA組成的panel可用于肝癌的動態監測。本領域也發現基于has-miR-122、has-miR-192、has-miR-21、has-miR-223、has-miR-26a、has-miR-27a、has-miR-801的檢測可用于肝癌的早期診斷。但是，原發性肝癌發病機理較為復雜，不同類型的患者生物標志物可能不盡相同，現有panel一般針對所有類型肝癌患者，缺乏針對性。本發明基于來源于外周血外泌體中異常表達的miRNA，針對HBV陽性(HBV+)且肝硬化(LC+)的HCC患者提出針對性panel用于肝癌的早期診斷。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種外周血外泌體miRNA聯合標志物在制備檢測早期肝癌試劑盒中的應用，其中miRNA聯合標志物為來源于血漿外泌體的hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-323b-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-134-5p、hsa-miR-4433b-3p、hsa-miR-222-3p。

作為優選，所述的試劑盒中包括：特異性檢測人hsa-miR-1307-3p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-323b-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-134-5p、hsa-miR-4433b-3p和hsa-miR-222-3p的檢測試劑。

作為優選，所述早期肝癌為HBV陽性(HBV+)且肝硬化(LC+)的原發性HCC。

在本發明的另一個方面，所述miRNA表達水平降低為|log₂ Fold Change|＞1.5，p-value0.05。