[發明專利]一種宮頸細胞保存液及其制備方法和保存方法

有效

• 申請號: 202111196651.9
• 申請日: 2021-10-14
• 公開（公告）號: CN113729009B
• 公開（公告）日: 2022-12-16
• 發明（設計）人: 張明偉;劉美靜;孫欣欣;李婧;盛春海;藍皓慧
• 申請（專利權）人: 山東高創醫療器械國家研究院有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 任美玲

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種宮頸細胞保存液及其制備方法和保存方法。該細胞保存液包括乙醇、異丙醇、乙二醇、丙三醇、苯氧乙醇、乙二胺四乙酸二鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、氯化鈉、二硫蘇糖醇、茶皂素、水；宮頸細胞保存液的pH值為6.8～7.2。本發明保存液可以有效軟化和分解樣本中的粘液，檢測背景清晰干凈，細胞形態觀察清楚。對紅細胞和白細胞的裂解效果好，能夠有效避免其對觀察結果的干擾。樣本保存液保存時間長、檢測效果穩定。環保無毒，對目標細胞沒有損害，且無需預處理步驟，配方簡單，操作簡便，保存成本較低。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及一種宮頸細胞保存液及其制備方法和保存方法。

背景技術

宮頸癌是中國女性第二大常見的惡性腫瘤，是目前唯一病因明確，可早期發現早期預防的癌癥，因此對宮頸癌的早期篩查對預防宮頸癌有著重要意義。宮頸癌的的篩查國際上通常采用TCT+HPV聯合篩查的模式，TCT是對細胞進行形態學的觀察做出臨床診斷，HPV是對細胞中核酸病毒類型進行檢測，但無論使用哪種方法，均需要用細胞保存液對樣本進行保存，通過細胞保存液對標本的保存處理可以完整的保存細胞原始形態和結構，才得到正確的診斷結果。

多數的細胞保存液常用高濃度的醇類、醛類，雖然能很好的固定細胞，但會使細胞固縮，導致制片效果不佳；而醇類、醛類濃度過低，無法長時間固定細胞，使細胞發生退化。多數的醇類和醛類都具有一定的毒性，對于從事相關行業的人員有一定的危害。另外某些醇類、醛類的加入對細胞內的DNA有較強的破壞性，不利于核酸提取，從而影響HPV的檢測結果。

人體宮頸脫落細胞成分復雜，往往含油粘液、血液，一種好的細胞保存液需要對標本成分進行固定，又需要對無用成分消除，以減少對實驗結果的影響。市場上的某些產品對樣本的保存時間短，對血液和粘液的處理效果差，不能兼顧TCT和HPV兩種檢測方法，達不到臨床的實際使用需求。

可見，現有的普通細胞保存液保護細胞的完整性與固定性比較差，細胞會發生固縮、溶解或膨脹，紅細胞不能得到有效去除，制片后背景中粘液比較多，保存液成分不能夠兼容TCT和HPV兩種檢測。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種宮頸細胞保存液及其制備方法和保存方法。該細胞保存液成分無毒環保，在宮頸脫落細胞學檢查中可以有效處理血液、粘液等干擾成分，保存核酸物質不丟失，可兼顧TCT和HPV樣本取材，適合長時間保存。能夠較好地保存宮頸脫落細胞，保護細胞的完整性與固定性，避免細胞固縮、溶解和膨脹，分解紅細胞，分散粘液，清除干擾成分，為后續制片染色提供良好的基礎。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種宮頸細胞保存液，包括乙醇、異丙醇、乙二醇、丙三醇、苯氧乙醇、乙二胺四乙酸二鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀、氯化鈉、二硫蘇糖醇、茶皂素、水；宮頸細胞保存液的pH值為6.8～7.2。

本發明以乙醇、異丙醇、乙二醇為固定劑，丙三醇、苯氧乙醇作為防腐劑和固定劑，多種固定劑成分可以應對宮頸細胞樣本中的復雜成分，能使細胞長時間保存不發生形態改變；乙二胺四乙酸二鈉具有細胞抗凝作用，不易使細胞中的血液發生凝固；磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉起到pH值緩沖作用，二者相互配合使用，可有助于提高緩沖效果；氯化鈉和氯化鉀用于維持細胞正常滲透壓，保持細胞不膨脹、不固縮，保持適宜的離子濃度也能夠有效保持細胞的形態；二硫蘇糖醇、茶皂素有助于細胞粘液、血液分散裂解，從而將宮頸細胞釋放出來，最終收集到具有診斷意義的細胞。

本發明的宮頸細胞保存液中各個組分配比合理，能夠快速固定細胞，穩定細胞的pH值，防止標本中血液凝結，及時裂解標本中的紅細胞，溶解標本中粘液的粘蛋白，同時防腐殺菌，使標本可以長期保存，兼顧TCT和HPV檢測同時取材，充分保留了有診斷意義的細胞成分，其制備過程工藝簡單，操作難度低，原材料無毒環保，成本低廉，易于實現規?；a。