[發(fā)明專利]櫻花SSR分子標記引物及在20個櫻花品種鑒定中的應用

在審

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• 申請日: 2021-10-13
• 公開（公告）號: CN113684308A
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發(fā)明（設計）人: 蔣冬月;沈鑫;孫澤碩;李因剛
• 申請（專利權）人: 浙江省林業(yè)科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京華際知識產(chǎn)權代理有限公司 11676
• 代理人: 袁瑞紅

本發(fā)明公開了櫻花SSR分子標記引物及在20個櫻花品種鑒定中的應用，通過從尾葉櫻基因組數(shù)據(jù)中獨立開發(fā)了櫻花品種SSR相關的分子標記引物，對開發(fā)的16對SSR引物進行擴增及多態(tài)性篩選，最終選擇引物ZJF01和ZJF02進行24個品種的鑒定，結果驗證通過2對引物組合就能將其中的20個櫻花品種進行區(qū)分鑒定，可見，本發(fā)明能夠采用很少的引物組合就能鑒別出20個櫻花品種，豐富了櫻花品種分子標記鑒定的類型，由于選用的引物對少，可以大大提高鑒定效率。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及櫻花SSR分子標記引物及在20個櫻花品種鑒定中的應用。

背景技術

櫻花為薔薇科(Rosaceae)李屬(Prunus sensu lato)櫻亞屬植物(subgenusCerasus)的統(tǒng)稱。櫻花是世界著名觀花喬木，盛開時繁花滿樹，末花時落英繽紛；作為經(jīng)濟價值較高的果木和高雅的園林花木，具有廣闊的開發(fā)利用前景。近百年來，通過自然變異篩選和人工雜交培育出600多個櫻花園藝品種。但是，由于許多品種間形態(tài)相似性較高、品種來源記載不詳、同物異名與異物同名現(xiàn)象頻發(fā)；且多數(shù)櫻花先花后葉，花葉不同期，易于雜交，形態(tài)變異豐富多樣，生活史長、花期相對較短，缺乏快速準確的鑒定方法(王賢榮，2014，Shi et al.，2013)。

近百年來，人們通過自然變異篩選和雜交培育的方式獲得了600多個櫻花園藝品種(袁冬明等，2018)。針對這些園藝品種，分類學家先后根據(jù)樹形、花、果、葉、冬芽等形態(tài)特性提出三級、五級分類標準及花期、花色分類標準(時玉娣，2007，藤木俊雄，2009，張瓊等，2012)。由于不同學者對形態(tài)性狀的判斷標準不一樣，品種間性狀交叉、重疊及在不同環(huán)境中具有很強的可塑性，造成形態(tài)學鑒定的困難，從而造成品種名混淆，同物異名、異物同名等現(xiàn)象時常發(fā)生。

隨著分子生物學的興起，分類學家開始使用不同的DNA分子標記研究櫻花種質(zhì)資源的多樣性及親緣關系。研究人員利用RFLP、AFLP等分子標記區(qū)分歐洲甜櫻桃(P.avium)與歐洲酸櫻桃(P.cerasus)(Badenes and Parfitt，1995；Hisayo et al.，2003；Zamani andBouzari，2012)，利用SSR、ISSR和SCAR標記區(qū)分櫻桃(P.pseudocerasus)、歐洲甜櫻桃、草原櫻桃(P.fruticosa)、山櫻花(P.serrulata)等(Cantini，2001；Khadivi-Khub et al.，2014；Barac et al.，2014；Kato et al.，2014；Zhang and Gu，2016；趙慶杰等，2016；宗宇等，2016)。但是，由于櫻花品種繁多，已有的分子標記分辨率低，不足以鑒定區(qū)分全部品種，因此，持續(xù)不斷開發(fā)新的分子標記，對于櫻花品種鑒定是非常必要的。SSR標記因其多態(tài)性高、穩(wěn)定性好、多等位基因、共顯性、數(shù)量豐富、基因組覆蓋性好和操作簡單等優(yōu)點(Powellet al，1996)廣泛用于遺傳多樣性、品種指紋圖譜繪制、品種鑒定、遺傳圖譜、目的基因定位等領域。本研究從尾葉櫻基因組數(shù)據(jù)中開發(fā)櫻花品種SSR相關分子標記，并研究其在櫻花品種鑒定中的應用，對櫻花品種鑒定以及分子標記輔助育種具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一在于提供一種櫻花SSR分子標記引物。

本發(fā)明的目的之二在于提供櫻花SSR分子標記引物在櫻花品種鑒定中的作用。

本發(fā)明目的之三在于提供一種鑒定櫻花的試劑盒。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

櫻花SSR分子標記引物，所述分子標記引物包括如下兩對，其正向引物和反向引物的核苷酸序列具體如下：

(1)ZJF01：正向引物序列為F：GATGTAGAGGGAGGTTCTGTATTTG(如SEQ ID NO.1所示)，反向引物序列為R：ACGGATCTAGTGAGGGATGGGTATG(如SEQ ID NO.2所示)；