[發明專利]一種非抗體依賴的循環腫瘤細胞檢測方法

在審

• 申請號: 202111189852.6
• 申請日: 2021-10-12
• 公開（公告）號: CN113777089A
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 崔征;邱清育;郭麗婷
• 申請（專利權）人: 福建省致慧醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/574
• 代理公司: 泉州市興博知識產權代理事務所(普通合伙) 35238
• 代理人: 王成紅

本發明公開了一種非抗體依賴的循環腫瘤細胞檢測方法，包括如下步驟：步驟1、取適量檢測者的外周血溶液，并去除紅細胞及白細胞，再通過細胞過濾器進行去除紅細胞及白細胞的雜質脫除，以此得到循環腫瘤細胞富集提取液；本發明具有以下有益效果，通過采用熒光電子顯微鏡配合病理圖像分析系統，再由適配循環腫瘤細胞的抗體溶液與標記的循環腫瘤細胞進行混合，再次記錄結合的數量，提高確定精度，防止多類干擾；采用細胞過濾器進行去除紅細胞及白細胞的殘留雜質脫除，方便后續處理并提高循環腫瘤細胞在外周血溶液當中的清晰度；加入凝集素，使得循環腫瘤細胞聚集，提高集中度，方便觀測，減小漏檢可能性。

技術領域

本發明屬于細胞檢測技術領域，特別涉及一種非抗體依賴的循環腫瘤細胞檢測方法。

背景技術

抗體，能識別特定外來物的一個獨特特征，該外來目標被稱為抗原；

從臨床來講，要判斷一個病人是否得了腫瘤，一直是一個很難明確回答的問題，這就會對很多病人造成誤診；比如說胰腺癌往往發現確診以后都是晚期的，為什么會這樣？就是因為在早期的時候，胰腺癌的確診非常困難；在很多難以確診的病人的血液中，如果說能夠檢查到循環腫瘤細胞，那對于配合醫生下腫瘤診斷的結論是具有積極意義的；

對于腫瘤的常規檢測手段來講，例如影像學；腫瘤在小于一公分的情況下，醫生也不認為它是異常；通過國內外研究可以看到，不要說是一公分，很多腫瘤在2-4毫米的情況下已經有腫瘤細胞進入血液循環，從這個角度講，它對于早期診斷來講有不可低估的意義；

大量實驗證明CTC的出現與晚期癌癥患者的預后密切相關，在進行預期檢測時一般僅可通過確定循環腫瘤細胞的數目及大概的外形來預測，為此，急需提出根據單一結合的非依賴(重復)性質，以提高精準確定類型的循環腫瘤細胞檢測方法。

發明內容

(一)要解決的技術問題

為了克服現有技術不足，現提出一種非抗體依賴的循環腫瘤細胞檢測方法，以解決上述背景技術提出的問題，通過采用結合特定性來精準確定循環腫瘤細胞數量的有益效果。

(二)技術方案

本發明通過如下技術方案實現：本發明提出了一種非抗體依賴的循環腫瘤細胞檢測方法，包括如下步驟：

步驟1、取適量檢測者的外周血溶液，并去除紅細胞及白細胞，再通過細胞過濾器進行去除紅細胞及白細胞的雜質脫除，以此得到循環腫瘤細胞富集提取液；

步驟2、將步驟1處理后的富集提取液進行循環腫瘤細胞分離；

步驟3、將步驟2分離的循環腫瘤細胞置于至熒光電子顯微鏡的觀位處，加入凝集素，靜置一段時間，使得循環腫瘤細胞聚集；

步驟4、使用熒光電子顯微鏡獲取觀位處循環腫瘤細胞的分布圖像；

步驟5、再由熒光電子顯微鏡配合病理圖像分析系統，通過使用人工智能對病理圖像中的細胞類型進行分類，并進行細胞量計數；

步驟6、若步驟5得到細胞量計數大時，再進行算出相同類型數量多的循環腫瘤細胞一種或多種，以確定循環腫瘤細胞的大致類型；

步驟7、將與步驟6一種或多種適配循環腫瘤細胞的抗體溶液，進行取適量置于步驟3的熒光電子顯微鏡的觀位處當中與標記的循環腫瘤細胞進行混合，靜置一段時間，所述抗體溶液的抗體：是以DNA分子為模板將具有超順磁性質的磁納米顆粒和能夠特異性識別腫瘤細胞的DNA適配體組裝形成；

步驟8、由熒光電子顯微鏡配合病理圖像分析系統進行觀察抗體溶液與標記的循環腫瘤細胞的結合情況，記錄結合反應的數量，提高確定精度；

步驟9、定期重復步驟1～步驟8對檢測者外周血溶液當中循環腫瘤細胞數量的變化檢驗，為確定癌癥的是否性提供助力。