[發(fā)明專(zhuān)利]一種狂犬病疫苗毒株的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111189272.7
• 申請(qǐng)日: 2021-10-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113881639A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韋顯凱;羅廷榮;李曉寧;劉誠(chéng);鄭敏;閉璟珊;周慶安;鄒聯(lián)斌;謝守玉;趙子欣;尹彥文;施開(kāi)創(chuàng);鄭列豐;郭建剛;李軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心
• 主分類(lèi)號(hào): C12N7/00
• 分類(lèi)號(hào): C12N7/00;C12N7/02;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京卓嵐智財(cái)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 魏偉

1.一種狂犬病疫苗毒株的制備方法，其特征在于：包括以下方法：

S1：孢毒種的種子社建立：將rRC-HLΔN株毒種P9,傳代擴(kuò)增并凍存為原始種子批；

S2：細(xì)胞毒種的檢定；

S3：狂犬病毒的培養(yǎng)和收液；取BHK-21細(xì)胞加生長(zhǎng)液置二氧化碳培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng),按隨機(jī)方式分為2組,分別加rRC-HL和rRC-HLΔN毒種過(guò)夜，換維持液后2組均在接種1周后收液，用于生產(chǎn)2種不同毒株的狂犬病疫苗并加以比較；

S4：細(xì)胞毒種的病毒繁殖曲線(xiàn)測(cè)定；取已制備的單層BHK-21細(xì)胞30瓶，分為3組并分別加人10^-3，10^-4,10^-5三個(gè)不同稀釋度的每種細(xì)胞適應(yīng)株，于2、4、6、8、10、12d取樣并進(jìn)行小白鼠毒力滴定；

S5：病毒原液的Elisa測(cè)定；

S6：狂犬病毒的純化；2種不同毒種培養(yǎng)得到的病毒原液分別經(jīng)醋酸鋅沉淀、凝膠過(guò)濾層析等純化方法制備成半成品。

S7：2種狂犬病毒株的電鏡檢測(cè)；將2種不同狂犬病毒株分別進(jìn)行電鏡觀察。

S8：連續(xù)3批疫苗的試驗(yàn)質(zhì)量評(píng)估。

2.如權(quán)利要求1所述的一種狂犬病疫苗毒株的制備方法，其特征在于：所述S2步驟中包括無(wú)菌試驗(yàn)、病毒滴定及外源因子檢測(cè)和鑒別試驗(yàn)和不同狂犬病毒株免疫原性比較。

3.如權(quán)利要求1所述的一種狂犬病疫苗毒株的制備方法，其特征在于：所述S5步驟中需要通過(guò)改良Elisa間接法，并使用抗狂犬病毒糖蛋白單元克隆抗體代替多克隆抗體。

4.如權(quán)利要求1所述的一種狂犬病疫苗毒株的制備方法，其特征在于：所述S8步驟中疫苗的安全和效力試驗(yàn)按照中國(guó)生物制品規(guī)程進(jìn)行，采用放免法檢測(cè)半成品種小牛血清殘余余量。