[發(fā)明專利]UHPLC-MS/MS法測(cè)定補(bǔ)肺活血膠囊在體內(nèi)血藥濃度的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111189194.0
• 申請(qǐng)日: 2021-10-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113917031B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 耿婉麗;李全;郭盛;王眾寬;陳婕;張小軍;嚴(yán)天宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東雷允上藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72
• 代理公司: 北京精金石知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

1.一種UHPLC-MS/MS法測(cè)定補(bǔ)肺活血膠囊在體內(nèi)血藥濃度的方法，其特征在于，包括以下步驟：

對(duì)照溶液的制備：取補(bǔ)骨脂苷、異補(bǔ)骨脂苷、毛蕊異黃酮苷、芒柄花苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、3-羥基-9，10-二甲氧基紫檀烷、新補(bǔ)骨脂異黃酮分別溶解并定容；定容后混合并逐級(jí)稀釋成系列濃度的混合對(duì)照溶液；

測(cè)試樣品的制備：取測(cè)試者血液制成血漿樣品并加入內(nèi)標(biāo)溶液為測(cè)試樣品；

UHPLC-MS/MS測(cè)定：利用超高效液相色譜和二級(jí)質(zhì)譜對(duì)混合對(duì)照溶液和測(cè)試樣品進(jìn)行定性、定量測(cè)定；

超高效液相色譜的色譜條件為：

色譜柱為ACQUITYUPLCBEHC₁₈柱；

流動(dòng)A相為0.1%甲酸水，流動(dòng)B相為0.1%乙腈；

梯度洗脫程序：

0-2min，95-88%A；

2-4min，88-85%A；

4-8min，85-65%A；

8-9min，65-60%A；

9-12min，60-40%A；

12-13min，40-15%A；

13-14min，15-95%A；

14-15min，95%A；

柱溫35℃，流速0.4mL·min^-1，進(jìn)樣量4μL；

二級(jí)質(zhì)譜的質(zhì)譜條件為：

離子化模式：ESI⁺/ESI^?；

檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)；

電噴霧電壓：4500V；

霧化氣壓力：413.7kPa；

氣簾氣壓力：137.9kPa；

輔助氣流速：413.7kPa；

離子源溫度：400℃；

碰撞氣：Low；

對(duì)照溶液的溶劑為甲醇；

取測(cè)試者血液制成血漿樣品的步驟為：采集測(cè)試者血液并置于預(yù)先涂有肝素鈉溶液的試管中離心，離心后取上清液；

所述內(nèi)標(biāo)溶液為克拉霉素和氯霉素的混合甲醇溶液；

加入內(nèi)標(biāo)溶液的同時(shí)加入乙腈。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的UHPLC-MS/MS法測(cè)定補(bǔ)肺活血膠囊在體內(nèi)血藥濃度的方法，其特征在于，血漿樣品加入內(nèi)標(biāo)溶液和乙腈，離心，移取上清液濃縮至干，加入甲醇復(fù)溶，離心，取上清液即為測(cè)試樣品。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的UHPLC-MS/MS法測(cè)定補(bǔ)肺活血膠囊在體內(nèi)血藥濃度的方法，其特征在于，超高效液相色譜的儀器為Waters ACQUITY UPLC系統(tǒng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的UHPLC-MS/MS法測(cè)定補(bǔ)肺活血膠囊在體內(nèi)血藥濃度的方法，其特征在于，二級(jí)質(zhì)譜的儀器為QTRAP 6500三重四極桿線性離子阱質(zhì)譜儀系統(tǒng)。