[發明專利]一種真菌液態培養法制備松茸菌菇調味料的方法

在審

• 申請號: 202111184155.1
• 申請日: 2021-10-12
• 公開（公告）號: CN113862159A
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發明（設計）人: 周濤;郝學財
• 申請（專利權）人: 天津春發生物科技集團有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A23L27/60;A23L31/00;C12R1/645
• 代理公司: 天津知川知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 12249
• 代理人: 胡翠

1.一種松茸菌絲體的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)取野生松茸子實體，清洗干凈后，備用；

(2)切片，純化培養；

(3)種子培養，得種子液；

(4)菌絲體擴培：將種子液與液態增殖培養基按體積比例1:10進行接種培養，培養條件為通氣量0.5-2(V/V·min)，攪拌轉速200-300rpm，增殖培養溫度22-28℃，增殖培養周期13-16d；

(5)將步驟(4)的培養液，用60目篩網進行過濾，收集篩上的松茸菌絲體。

2.根據權利要求1所述一種松茸菌絲體的制備方法，其特征在于：所述的步驟(1)為將新鮮野生松茸子實體用清水洗凈，再用75％乙醇溶液浸泡0.5min，用無菌鑷子將菌株取出至盛有無菌水的平皿中，涮洗待用。

3.根據權利要求1所述一種松茸菌絲體的制備方法，其特征在于：所述的步驟(2)為用無菌刀片，從食用菌子實體中切出邊長1cm的小塊接種于PAD瓊脂培養基中，并置于恒溫培養箱25-28℃下，培養14-16天，待菌絲體長出，再用接種鉤轉接部分菌絲至新的PDA培養基中，純化培養后，待用。

4.根據權利要求1所述一種松茸菌絲體的制備方法，其特征在于：所述的步驟(3)為將步驟(2)中純化得到的菌絲，用無菌刀片切成邊長2-3cm的小塊接種于種子培養基中在22-28℃下搖瓶培養3天，即為種子液；種子培養基的配方為：玉米粉：30.0份，豆粕粉：15.0份，K₂HPO₄：3.0份，MgSO₄：1.5份，水1000份，自然pH；裝液量：150mL/500mL三角瓶。

5.根據權利要求1所述一種松茸菌絲體的制備方法，其特征在于：

液態增殖培養基的碳源為葡萄糖、果糖、麥芽糊精、蔗糖、麥芽糖、大豆油、甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜、麥芽糖醇、大米粉、甘油、半乳糖、甘露醇、山梨醇、乳糖、淀粉、玉米粉中的一種或兩種以上，優選地，所述碳源為葡萄糖、甘油、大豆油中一種或兩種以上；更優選地，所述碳源為大豆油和甘油。

液態增殖培養基的氮源為酵母浸粉、胰蛋白胨、酪蛋白胨、麥芽浸出物、酪蛋白、脫脂奶粉、牛肉膏、濃縮蛋白、玉米漿、豆粕粉、豆餅粉、棉籽粉、花生餅粉、麩皮、硝酸銨、硫酸銨、氨水、尿素、碳酸銨、氯化銨、硝酸鈉中的一種或兩種以上，優選地，所述氮源為麥芽浸出物、玉米漿、酵母浸粉中的一種或兩種以上，更優選地，所述氮源為酵母浸粉；

所述碳源和氮源的質量份數比為：(2-4)：(1-2)。

6.根據權利要求5所述一種松茸菌絲體的制備方法，其特征在于：液態增殖培養基的配方為碳源：2-4份，氮源：1-2份；K2HPO₄：0.2-0.4份，MgSO₄：0.1-0.3份，VB1：0.01-0.02份，水：100份。

7.根據權利要求1所述一種松茸菌絲體的制備方法，其特征在于：所述步驟(4)中首次裝料量為發酵罐總容積的40％，培養過程中每隔2天補料1次，每次補料液態增殖培養基，補料量為罐體容積5％。優選的，通氣量0.5(V/V·min)，攪拌轉速200rpm，增殖培養溫度25℃，增殖培養周期14-16d，進一步優選15d，即可終止培養。

8.一種松茸菌菇復合調味料的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

將權利要求1-7任一項方法中制備得到的松茸菌絲體用清水浸洗2次，以除去殘留在菌體表面上的發酵液；再將清洗完畢得到的菌絲體按質量比1:1加水，過膠體磨，得菌菇醬；

將菌菇醬加熱升溫度至100℃，保溫30min，加鹽、D-異抗壞血酸鈉、山梨酸鉀，混合均勻后，灌裝即得松茸菌菇調味料產品。

9.根據權利要求8所述一種松茸菌菇復合調味料的制備方法，其特征在于：鹽的添加量為菌菇醬質量的4％-8％，D-異抗壞血酸鈉的添加量為菌菇醬質量的0.01％；山梨酸鉀的添加量為菌菇醬質量的0.01％。

10.一種松茸菌菇復合調味料，其特征在于：該松茸菌菇復合調味料由包括權利要求8或9的方法制備得到。