[發明專利]基因遞送組合物以及西地那非在提高目的基因表達中的應用

在審

• 申請號: 202111182221.1
• 申請日: 2021-10-11
• 公開（公告）號: CN113774088A
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 吳俠;周凱藝;肖嘯;袁夢
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N5/10;A61K48/00;A61K31/519;A61K9/00;A61K9/08;A61K9/14;A61P35/00;A61P35/02;A61P37/02;A61P31/00;A61P43/00
• 代理公司: 上海華誠知識產權代理有限公司 31300
• 代理人: 湯國華

本發明涉及基因遞送組合物、包含該基因遞送組合物的藥物、西地那非在提高重組AAV載體介導的目的基因表達中的應用，以及西地那非在降低AAV載體的中和抗體中的應用。西地那非的應用可以提高AAV載體在基因治療中的安全性和有效性。

技術領域

本公開涉及基因遞送組合物、包含該基因遞送組合物的藥物、西地那非在提高重組AAV載體介導的目的基因表達中的應用以及西地那非在降低AAV載體的中和抗體中的應用。

背景技術

腺相關病毒(Adeno-associated virus，AAV)技術是目前廣泛應用于基因治療領域的重要技術之一。AAV病毒具有低致病性、高效的長期基因表達、易于基因操作等優點。然而，AAV載體在應用方面也存在一定的限制。利用基因療法治療疾病(如杜氏肌營養不良癥(DMD))時，有時需要通過循環系統全身注射給予高劑量的AAV載體，才能夠達到治療效果。此外，利用AAV9載體治療腦部疾病時也需要很高的劑量才能透過血腦屏障，進而感染靶組織并遞送表達正常蛋白的基因。然而，臨床數據顯示，高劑量的AAV載體會引起較重的免疫反應，導致不必要的副作用。高劑量的AAV載體一方面會引起肝臟的毒性反應，另一方面由于產生中和抗體會降低基因治療的效果。

因此，期望增加AAV介導的基因的蛋白表達，從而可以在不顯著降低目的基因表達的情況下實現病毒載體劑量的降低，進而減輕基因治療中因高劑量AAV載體而引起的不良反應。

發明內容

本發明人出人意料地發現，西地那非(一種5型磷酸二酯酶抑制劑)不僅可以提高重組AAV載體介導的目的基因的表達，還可以降低AAV載體的中和抗體。

因此，在第一方面，本公開提供一種基因遞送組合物，其包含西地那非和重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組AAV載體包含AAV衣殼蛋白和目的基因。

在一個實施方式中，目的基因編碼治療性蛋白質或非治療性蛋白質。

在一個優選實施方式中，治療性蛋白質包括在受試者體內具有治療疾病作用的蛋白質，疾病包括：癌癥、自身免疫性疾病、暴露于感染性因子導致的疾病以及遺傳性疾病。

在一個優選實施方式中，非治療性蛋白質包括在受試者體內具有除治療疾病之外的有益作用的蛋白質，例如具有營養強化或美容功效的蛋白質。

在一個實施方式中，AAV衣殼蛋白為天然AAV衣殼蛋白或人工改造的AAV衣殼蛋白。在一個優選實施方式中，AAV選自：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11，AAV12、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAV-DJ9、AAVrh8、AAVrh8R和AAVrh10，更優選為AAV9。

在一個實施方式中，基因遞送組合物包含1×10⁹至1×10¹⁵vg的重組AAV載體和5μg至100mg的西地那非。在一個優選實施方式中，基因遞送組合物包含1×10¹²至2×10¹³vg的重組AAV載體和1mg至50mg的西地那非。

在第二方面，本公開提供用第一方面所述的基因遞送組合物轉染或轉導的分離的宿主細胞。

在第三方面，本公開提供一種藥物，其包含根據第一方面所述的基因遞送組合物和賦形劑。

在一個實施方式中，賦形劑包括多元醇、糖、緩沖劑、防腐劑和無機鹽中的一種以上。

在一個實施方式中，藥物為注射劑如注射液和注射用無菌粉末的形式

在一個實施方式中，藥物通過全身途徑或局部途徑施用，例如靜脈內施用、肌內施用、皮下施用、經口施用、局部接觸、腹膜內施用和病灶內施用。