[發明專利]一種3a型丙型肝炎病毒全長感染性克隆突變體及其應用

有效

• 申請號: 202111174500.3
• 申請日: 2021-10-08
• 公開（公告）號: CN113862287B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 李義平;陳明曉;李妮
• 申請（專利權）人: 中山大學
• 主分類號: C12N15/51
• 分類號: C12N15/51;C12N7/01;C07K14/18;C12N5/10;A61K38/16;A61P1/16
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;郝傳鑫

本發明涉及生物技術領域，公開了一種基因3a型丙型肝炎病毒全長感染性克隆及其應用。本發明提取感染HCV的血清RNA，最終獲得CH3a毒株的全長基因組序列，通過構建CH3a?Core?NS2/JFH1和5’UTR?NS5A/JFH1，并在DBN毒株5’UTR?NS5A的幫助下獲得功能性的CH3NS5B?3’UTR。從上述具感染性的嵌合病毒中鑒定到多個新突變，特別是NS5B和3’UTR內的新突變和小片段缺失。最后，綜合運用突變點組合，成功構建了可感染Huh7.5系列細胞的CH3a感染性克隆。CH3a感染性克隆對不同抗病毒藥物呈濃度依賴性反應，展示CH3a病毒克隆在抗病毒藥物研究等方面的潛在應用。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是一種3a型丙型肝炎病毒全長感染性克隆 突變體及其應用。

背景技術

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是導致慢性肝炎、肝硬化和肝癌的 一個重要病原體。HCV屬于單鏈正義RNA病毒，反向遺傳系統是RNA病毒研 究的一個重要技術體系，然而代表不同基因型毒株的HCV細胞感染性克隆體系 的缺乏制約了對HCV生活周期、發病機制、疫苗等方面的研究。

近年來針對HCV非結構蛋白NS3、NS5A、NS5B的直接作用抗病毒藥物 (direct-acting antiviral agents,DAAs)對持續病毒學應答(sustained virological responseat 12weeks post treatment,SVR12)取得重大成果，SVR12高達99％。 隨著DAAs陸續獲批上市，這一公共衛生問題帶來了突破性的進展，有望實現 HCV治愈。

HCV在體內長期的慢性感染過程中，由于高突變率和高復制率，導致其在 感染者體內同時呈現多種變異株，又與不同器官組織的宿主細胞和免疫系統長 期相互適應和作用，形成龐大的準種庫。HCV以準種的形式分布在感染者的體 內，也使其容易逃離機體免疫的監控，因而影響其被有效地清除，導致機體很 難徹底擺脫其感染的發展，故易形成慢性肝炎。HCV準種變異在宿主體內的持 續存在對病毒感染的控制、抗病毒藥物和疫苗的發展都是巨大的挑戰，也是目 前DAAs藥物面臨的最大威脅。

HCV主要分為8種主要基因型(genotype，GT)和67種亞型基因。主要基 因型之間序列差異約為30％，多數主要基因型又可分為多種亞型(用a、b、c 等表示)，各亞型之間的序列差異為20-25％。不同基因型HCV具有一定的地區 和人群分布，治療反應和致病機制的差異性。除了遺傳生物學差異外，基因型 還是影響藥物治療效果的一個重要因素。其中，3a和6a型HCV越來越受到更 多關注。基因3a型HCV感染與脂肪病變和纖維化高度相關，且特殊表現出對 現行的DAAs敏感性低，導致治愈率相對較低；臨床上還發現感染3a型HCV 的病人的脂肪肝發病率高于其它基因型病毒感染的病人。HCV基因組具有很強 的異質性，目前還沒有代表我國區域的3a型HCV毒株的感染模型，因此，建 立我國本土3a型HCV毒株的感染模型對開展我國HCV的基礎研究和臨床試驗 非常有必要。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種3a型丙型肝炎 病毒全長感染性克隆突變體及其應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：