[發(fā)明專利]一種異化金屬還原菌自驅(qū)動同步生物芬頓降解有機污染物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111174169.5
• 申請日: 2021-09-30
• 公開（公告）號: CN113755392B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖翔;彭潔茹;李常杏;范陽陽;何恩靜;黃靖;曹鳳婷;石玉
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/38;C02F1/72;C12R1/01;C02F101/30
• 代理公司: 合肥輝達知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 34165
• 代理人: 汪守勇

1.一種異化金屬還原菌自驅(qū)動同步生物芬頓降解有機污染物的方法，其特征在于，兼性好氧的異化金屬還原菌通過有氧呼吸自身產(chǎn)生H₂O₂，同時在有氧條件下通過還原途徑實現(xiàn)細胞外Fe(Ⅲ)還原生成Fe(Ⅱ)，繼而活化體系中的H₂O₂產(chǎn)生高反應(yīng)活性的羥基自由基?OH，從而氧化降解體系中的有機污染物；

所述兼性好氧的異化金屬還原菌選自Shewanella?oneidensis?MR-1野生型，菌株編號是ATCC?700550?；

所述有機污染物選自偶氮染料、三苯甲烷染料或者多環(huán)芳烴。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述Fe(Ⅲ)源選自檸檬酸鐵、Fe₂SO₄、針鐵礦、水鐵礦或者磁鐵礦。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟如下：

（1）配置含有10?mM乳酸和含有5?mg/L羅丹明B廢水的礦物鹽培養(yǎng)基，使用50?mL血清瓶分裝30?mL降解體系，用透氣膜封口，滅菌備用；再將針鐵礦以終濃度0.5?g/L添加到礦物鹽培養(yǎng)基中；

（2）將保存在甘油中的Shewanella?oneidensis?MR-1劃線于LB平板上，30℃過夜培養(yǎng)；

（3）用無菌牙簽挑取活化好的單菌落，接種于50?mL的LB液體培養(yǎng)基中，于30℃和200rpm轉(zhuǎn)速條件下震蕩培養(yǎng)至對數(shù)后期；

（4）在4℃下，以5000?rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘收集菌體細胞，之后用磷酸鹽緩沖溶液重懸洗滌兩次，制成菌懸液備用；

（5）在超凈臺中，將步驟（4）所得到的菌懸液以終濃度1×10⁷細胞/毫升添加到裝有等量培養(yǎng)基的血清瓶中進行污染物降解；

（6）30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，定時取樣，羅丹明B的濃度直接根據(jù)其在554?nm的吸光值來計算；

（7）直至污染物羅丹明B降解完全。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟如下：

（1）配置含有10?mM乳酸和5?mM檸檬酸鐵的礦物鹽培養(yǎng)基，使用50?mL血清瓶分裝30?mL降解體系，用透氣膜封口，滅菌備用；

（2）將保存在甘油中的Shewanella?oneidensis?MR-1劃線于LB平板上，30℃過夜培養(yǎng)；

（3）用無菌牙簽挑取活化好的單菌落，接種于50?mL的LB液體培養(yǎng)基中，于30℃和200rpm轉(zhuǎn)速條件下震蕩培養(yǎng)至對數(shù)后期；

（4）在4℃下，以5000?rpm的轉(zhuǎn)速離心5分鐘收集菌體細胞，之后用磷酸鹽緩沖溶液重懸洗滌兩次，制成菌懸液備用；

（5）在超凈臺中，將步驟（4）所得到的菌懸液以終濃度1×10⁷細胞/毫升，含終濃度5?mM的1,4-二氧六環(huán)廢水添加到裝有等量培養(yǎng)基的血清瓶中進行污染物降解；

（6）30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，定時取樣，1,4-二氧六環(huán)的濃度是由高效液相色譜法測定，其分離柱為Hypersil?GOLD^TM-C18色譜柱，柱溫25℃，流動相為95%水和5%乙腈，流速1?mL/min，使用紫外可見檢測器，檢測波長為190?nm；

（7）直至污染物1,4-二氧六環(huán)降解完全。