[發明專利]一種諾如病毒核酸檢測試劑盒及其使用方法

有效

• 申請號: 202111173449.4
• 申請日: 2021-10-08
• 公開（公告）號: CN113930545B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 趙百慧;楊孫孝;李春明;王馨玉
• 申請（專利權）人: 上海伯杰醫療科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 王法男

本發明的一種諾如病毒通用型核酸檢測試劑盒及使用方法，包括諾如病毒反應液、陽性對照液和陰性對照液，諾如病毒反應液為預分裝至八連管中的凍干粉。其中，諾如病毒反應液中含有多條不同熒光標記的探針、引物、酶混合物、增強劑、凍干保護劑、10xbuffer、核苷酸混合物等，可以在同一反應體系中檢測是否感染諾如病毒。通過內源性內參對樣本采集、核酸提取、擴增和檢測整個過程進行監控，避免因假陰性結果而導致的誤判。探針為包括熒光報告基團和淬滅基團的寡核苷酸。當探針完整時，由于淬滅基團空間位置上靠近報告基團從而抑制報告基團發出熒光。引物延伸時，與模板結合的探針被Taq酶(5’→3’外切核酸酶活性)切斷，報告基團與淬滅基團分離，產生熒光信號，從而實現對諾如病毒在核酸水平上的檢測。

技術領域

本發明涉及諾如病毒核酸檢測技術領域，尤指一種諾如病毒核酸檢測試劑盒及其使用方法。

背景技術

諾如病毒(Norovirus，NV)是引起腸道急性病癥的RNA病毒，根據RNA多聚酶區核苷酸序列的相似性，將NV分為5個基因型(GI～GV)，其中只有GI、GⅡ和GIV可以感染人。諾如病毒已被很多國家認為是導致成人和兒童病毒性腹瀉及腸胃炎的首要病原體，以手-糞-口為主，其次是直接接觸傳染，我國流行的人類諾如病毒主要以基因組Ⅱ為主。感染臨床表現為急性胃腸炎和滲透性腹瀉病，病程一般為7天，發熱持續3天，嘔吐2～3天，腹瀉5天，嚴重出現脫水癥狀。諾如病毒多在寒冷的冬季發病，所以又被稱為冬季嘔吐癥。因為其不能在細胞或組織中培養，對診斷工作帶來了一定的困難。

經過檢索，中國發明專利：腹瀉病原體多重基因檢測體系及其試劑盒和應用(申請號為201710503230.3，申請日為2017.06.27)，該申請案公開了一種腹瀉病原體多重基因檢測體系及其試劑盒和應用。檢測體系共有22對引物，其中包括19對腹瀉病原體、2對人基因組內參和1對系統質控內參引物。腹瀉病原體分別針對空腸彎曲菌、志賀菌、艱難梭菌、腸炎沙門菌、鼠傷寒沙門菌、腸產毒性大腸埃希菌、大腸埃希菌O157、弧菌、小腸結腸炎耶爾森菌、人星狀病毒、諾如病毒II、人腸道腺病毒、輪狀病毒等?？稍谕环磻w系內直接對糞便樣本進行多種腹瀉病原體的同步檢測和分析，彌補了常規檢測方法通量低、耗時長和檢出率低等缺點，第一時間為臨床提供全面、精準、低成本的病原學診斷，為個體化用藥和精準醫療提供重要參考。但是該申請案針對多種引起腹瀉的病原體(包括細菌和病毒)進行檢測，所用方法為毛細管電泳，通過引物設計，不同的病原體可擴增不同長度的DNA片段，將擴增產物從PCR儀取出后轉移至毛細管電泳分析儀中分析擴增片段長度，不同長度DNA片段電泳速度不同，從而區分不同的病原體。該申請案的不足之處：1.引物設計復雜，引物合成成本較高。2.檢測過程耗時較長，需先提取核酸，再PCR擴增，再毛細管電泳分析片段長度進而分析可能感染的病原體。3.如若引物設計不夠合理，不同目的基因擴增片段長度相差過小，則會因為電泳中的漂移問題，無法有效判斷擴增片段的大小，進而帶來檢測誤差。4.該方法僅包含諾如GⅡ型擴增引物，因此無法檢測其他型別的諾如病毒。而目前不管是從臨床個性化診治還是國家疾控傳染病監測需要，均需監測并區分常見患者所感染的諾如病毒型別。

發明內容

本發明提供一種諾如病毒核酸檢測試劑盒及其使用方法，將針對檢測諾如GⅠ型和GⅡ型病毒檢測并對其分型鑒定的效率慢、容易產生誤差以及成本高的的技術問題。

本發明提供的技術方案如下：一種諾如病毒核酸檢測試劑盒，包括諾如病毒反應液、陽性對照液和陰性對照液。

優選地，所述諾如病毒反應液包括酶混合物、核苷酸混合液、10xBuffer、增強劑、凍干保護劑、諾如病毒GⅠ上游引物、諾如病毒GⅠ下游引物、諾如病毒GⅠ探針P1、諾如病毒GⅠ探針P2、諾如病毒GⅡ上游引物、諾如病毒GⅡ下游引物、諾如病毒GⅡ探針、內參β-actin上游引物、內參β-actin下游引物和內參β-actin探針。

優選地，所述檢測靶標位于諾如病毒GI型的VP1基因，所述檢測靶標位于諾如病毒GII型的ORF基因。