[發(fā)明專利]一種表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)及其制備方法

有效

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• 申請日: 2021-10-08
• 公開（公告）號: CN113908589B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟建強(qiáng);郭淼媛;葉劍龍
• 申請（專利權(quán)）人: 天津工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: B01D15/38
• 分類號: B01D15/38;B01J20/26;B01J20/281;B01J20/30
• 代理公司: 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 12108
• 代理人: 王夢

本發(fā)明公開了一種表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)的制備方法，其依次通過再生纖維素膜氧化、引入疏水電荷誘導(dǎo)模式配體及ATRP反應(yīng)引發(fā)劑，印跡模板蛋白免疫球蛋白G，通過ATRP反應(yīng)將模板蛋白印跡在聚合物層中，以及模板蛋白解吸附五個(gè)步驟實(shí)現(xiàn)表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)的制備；該表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)的制備方法的操作過程簡單，條件溫和，且采用該方法制備得到的表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)為一種具有疏水電荷誘導(dǎo)模式及分子印跡模式的雙識別模式的層析介質(zhì)，可以高效純化抗體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物分離領(lǐng)域，特別涉及一種表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)及其制備方法。

背景技術(shù)

隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，具有特異性強(qiáng)、毒性低、生物功能明確等特點(diǎn)的蛋白質(zhì)藥物在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用不斷擴(kuò)大。然而，生物醫(yī)藥行業(yè)對抗體藥物的純度及活性有很嚴(yán)格的要求，這導(dǎo)致純化成本較高占到總生產(chǎn)成本的50％～80％。因此，開發(fā)出一種經(jīng)濟(jì)高效的生物藥物分離純化方法，對生物醫(yī)藥領(lǐng)域有重大意義。

層析技術(shù)作為純化分離最重要的一種途徑，不但選擇性高，而且可以較好的保持生物制品的活性，是分離純化蛋白類產(chǎn)品最理想的方法之一。近年來，混合模式層析由于其具有高選擇性、高分離效率和高負(fù)載能力的優(yōu)勢，已經(jīng)成為蛋白質(zhì)純化領(lǐng)域的熱點(diǎn)方向。基于該技術(shù)的介質(zhì)兼有多種作用模式，包括疏水作用，靜電作用和氫鍵作用等。其中將疏水相互作用與離子交換作用相結(jié)合的疏水電荷誘導(dǎo)層析(HCIC)在純化抗體方面有巨大潛力，有望在很多場合有效替代Protein A親和層析，以降低抗體藥物的分離成本。然而，疏水電荷誘導(dǎo)層析技術(shù)對靶蛋白的選擇性仍需進(jìn)一步提高。而將其與另外一種具有高識別目標(biāo)分子能力的技術(shù)相結(jié)合可能是一個(gè)很好的解決方法。

分子印跡技術(shù)(MIT)具有高選擇性及優(yōu)秀的特異性識別能力，被廣泛應(yīng)用于分離領(lǐng)域。它是通過在制備過程中形成的“印跡空腔”優(yōu)先與目標(biāo)分子發(fā)生相互作用來進(jìn)行識別與分離。目前，關(guān)于小分子的印跡技術(shù)已經(jīng)發(fā)展的十分成熟，然而，由于蛋白質(zhì)分子尺寸較大，結(jié)構(gòu)靈活多變且易于變性，因此對其進(jìn)行分子印跡仍然是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。近年來，為了解決蛋白質(zhì)分子在印跡材料中的擴(kuò)散限制、變性失活以及難以洗脫等問題，一系列新型印跡方法發(fā)展起來，包括表面印跡、表位印跡、微接觸印跡等，這些方法都成功的將分子印跡技術(shù)應(yīng)用到了蛋白質(zhì)分離純化領(lǐng)域。將HCIC和表面印跡相結(jié)合，是制備高選擇性色譜層析介質(zhì)的有效方法。如Shi等人將HCIC與MIT相結(jié)合獲得的雙識別模式樹脂4FF-Try/MIPs從牛血清中分離出的牛血清白蛋白的純度比單識別模式樹脂4FF-Try高約20％(Separationand Purification Technology,2018,202:165-173)。但是，制備過程比較復(fù)雜，他們首先對瓊脂糖凝膠進(jìn)行活化和溴化處理，然后在材料表面偶聯(lián)上HCIC配體，在印跡蛋白之后又通過有機(jī)硅烷的溶膠-凝膠聚合得到印跡層，最后解吸蛋白獲得雙識別模式樹脂4FF-Try/MIPs。要使層析介質(zhì)具有雙識別模式，需要將HCIC配體的選擇性引入與表面分子印跡技術(shù)相結(jié)合，這會增加層析介質(zhì)制備過程的復(fù)雜程度。因此，尋求更加簡便高效的配體表面接枝方法成為制備雙識別模式層析介質(zhì)的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種操作簡便，條件溫和的表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)的制備方法。

本發(fā)明的另一目的是提供一種采用上述表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)的制備方法制備得到的表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)

為此，本發(fā)明技術(shù)方案如下：

一種表面印跡抗體的疏水電荷誘導(dǎo)模式膜層析介質(zhì)的制備方法，步驟如下：

S1、將再生纖維素膜浸泡于氧化劑溶液中，并于20～60℃下攪拌2～6h；

該步驟S1的目的在于：將膜表面的羥基氧化為醛基。